貓頭鷹是國家二級保護動物。貓頭鷹的食物主要是老鼠，也有昆蟲、鳥、蜥蜴、魚等動物。它們都有吐“食丸”的習慣，具有消化能力，食物往往是整個吞下，食物中不易消化的骨頭、羽毛、毛發、甲殼素等殘渣整合成塊，形成壹小團通過食道和口腔吐出，稱為食丸，也叫唾液。
微穴只是貓頭鷹飲食的壹部分。貓頭鷹也捕食鳥類、青蛙、蜥蜴等。壹些小種類的貓頭鷹，如有垂直條紋的貓頭鷹和鷸，也大量捕食昆蟲。所以貓頭鷹也有助於消滅害蟲。貓頭鷹的爪子可以輕易穿透蛇的身體，它的喙可以給蛇致命的壹擊。雖然鳥類對蛇毒不能免疫，但貓頭鷹腿上的羽毛也能幫助它們抵禦毒蛇的攻擊，貓頭鷹會突然從天而降，讓蛇難以自衛。
貓頭鷹吃生物，所以會吃青蛙，但是需要註意的是，有些貓頭鷹吃青蛙，所以不是所有的貓頭鷹都吃青蛙。大型貓頭鷹(禿鷲)喜歡吃小型哺乳動物和中型鳥類，如兔子、野雞和鷓鴣。中型貓頭鷹(長耳貓頭鷹)喜歡吃嚙齒動物和小鳥！比如田鼠和壹些麻雀大小的鳥類。小貓頭鷹(鷸)喜歡吃爬行動物和昆蟲。比如蜥蜴和蚱蜢。
貓頭鷹是色盲，它們是唯壹不能辨別顏色的鳥類。除了壹些習慣於夜生活的鳥類，如貓頭鷹，許多鳥類都有顏色感，因為視網膜中沒有視錐細胞。