4.啟動子下遊限制性位點的正下方連接壹個C,使插入片段與啟動子之間有壹定的空間,以保證轉錄。
5.SHRNA靶序列的第壹個堿基必須是G才能保證RNA聚合酶轉錄。如果所選目的序列不是以G開頭,則必須在直接連接的檢測鏈上遊添加壹個G。