將患者的唾液、脊髓液、口腔、宮頸、陰道分泌物或角膜、結膜的刮屑接種於易感細胞，培養1 ~ 2天，細胞腫脹、變圓、相互融合，可用於初步診斷。然後用免疫熒光(IFA)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)鑒定HSV。如有必要，鍵入。
(2)抗原檢測
通過IFA和ELISA直接檢測細胞或分泌物中的抗原，可以快速診斷HSV感染。
(三)抗體檢測
用補體結合試驗和ELISA檢測患者血清中的抗體可用於原發感染的診斷，但不能與反復感染相鑒別。由於HSV感染率高，潛伏感染廣泛，血清中抗體水平高，反復感染時很難觀察到抗體滴度的升高。檢測脊髓液中的抗體對神經系統HSV感染具有重要意義。
此外，DNA分子雜交和PCR在檢測HSVDNA方面也顯示出很大的優勢。現在多用於實驗研究，將在臨床推廣應用。