?對於從事RNA，尤其是非編碼RNA（non-coding RNA，ncRNA）研究的人而言，miRNA的生物生成與功能主要包括：（1）轉錄生成pri-miRNA；（2）DROSHA在核內切割pri-miRNA，產生pre-miRNA；（3）pre-miRNA在Exportin-5的轉運下進入細胞質，在DICER的切割下形成miRNA duplex；（4）miRNA duplex加載到AGO中，形成RISC復合體，發揮生物學功能。但生命的獨特之處就在於其非單壹性，以miRNA為例，miR-451的加工就只需要DROSHA和AGO，不需要DICER。因此，為例根據精細評估miRNA的pri-miRNA加工，研究者建立體外DROSHA加工與測序方法，定量分析DROSHA在pri-miRNA上的切割位點與效率。
三言兩語
1.體外合成125bp 的pri-miRNA，經過T7 RNA聚合酶體外轉錄後，使用純化的DROSHA/DGCR8復合體進行體外切割，對切割產物進行小RNA測序，通過測序結果確定切割產物RNA的末端，進而可以評估DROSHA在pri-miRNA上的切割位點。
2.結果表明在評估的1881個miRNA中，僅758個miRNA是DROSHA依賴的，還存在大量的非DROSHA依賴的miRNA加工方式。此外也發現壹些DROSHA的切割位點存在顯著的差異：壹些pri-miRNA上的DROSHA切割位點很特異；壹些pri-miRNA上存在多個DROSHA切割位點；並且在壹些pri-miRNA上DROSHA僅產生切口（僅切割壹側的RNA）；部分pri-miRNA上的DROSHA甚至與傳統的位點相反（更靠近pri-miRNA的3‘端）。
3.SRSF3作為DROSHA/DGCR8復合體的***調控因子，參與對pri-miRNAde 的加工。
Reference
Kim, K. et al. A quantitative map of human primary microRNA processing sites. Mol Cell (2021).