CRISPR/Cas(聚類規則間隔短回文重復序列/Cas)系統是目前廣泛使用的基因編輯系統。其原理是CRISPR轉錄產生的gRNA介導CAS核酸酶靶向靶序列並切割該序列。
編輯CRISPR/Cas9基因示意圖
(資料來源:惠康信托桑格研究所，桑格)
那我們來看看妳問的CRISPR/Cas基因敲除。
在CRISPR/Cas9系統中，sgRNA(smallguideRNA)識別並結合目標基因的目標序列，引導Cas9切割結合位點，導致DNA雙鏈斷裂，DSB)，生物體自身通過非同源重組修復DSB()。參與修復的蛋白質往往在DNA末端插入或刪除幾個堿基，修復後的基因因突變而失去功能，從而實現體內基因敲除。
最後，我們來看看如何應用。
應用:建立基因敲除細胞系，通過基因敲除建立動物疾病模型。
技術優勢:與在mRNA水平敲除靶基因的RNAi相比，CRISPR/Cas9系統引起基因序列的缺失，從而完全沈默(即敲除)靶基因。
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