1，稀釋倒置平板法
先將微生物懸液進行系列稀釋(如1:10，1:100，1:1000，1:10000)，然後再將微生物懸液單獨稀釋。如果適當稀釋，可在平板表面或瓊脂培養基中出現分散的單個菌落，這可能是由細菌細胞的繁殖形成的。然後挑單菌落，或者重復幾次以上操作，就可以得到純培養。
2.稀釋塗布平板法
將融化的培養基倒入無菌平板中制成無菌平板，待冷卻凝固後，在平板表面滴壹定量的微生物懸液，然後用無菌玻璃塗抹棒將菌液均勻分散在整個平板表面，培養後挑取單菌落。
3、平線法
微生物樣品在固體培養基表面由點到線多次稀釋，實現分離。
4、稀釋搖管法
首先將壹系列裝有無菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂融化，然後冷卻並保持在50℃左右。待分離的物質用這些試管梯度稀釋，試管快速搖勻。冷凝後，將壹層滅菌的液體石蠟和固體石蠟的混合物倒在瓊脂柱表面，將培養基與空氣隔開。