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如何分離純化培養土壤中的微生物?

1.土樣采集:取10克約10厘米的深層土壤備用。?

2.土壤稀釋液的配制:稱取1g土壤,放入裝有99mL無菌水的三角瓶中,搖勻,即為稀釋後的10-2土壤懸液。然後進行十倍梯度稀釋依次準備?10-3、10-4、10-5

、10-6?、10-7?土壤稀釋劑的稀釋。?3.培養基平板的制備:按照培養基配方制備100ml牛肉醬蛋白腖瓊脂培養基、馬丁氏培養基、高斯I培養基。滅菌後,分別倒3盤。(10在滅菌前將10%的苯酚滴加到高氏I培養基中;加入2ml脫氧膽酸鈉(2%)和0.4ml?10000單位/毫升鏈黴素)?

4.接種:用無菌吸管吸取相應濃度的0.1ml土壤稀釋液,用無菌操作技術接種於平板上,均勻塗布。細菌選自10-4、10-5和10-6?將三種稀釋液接種於牛肉醬蛋白腖瓊脂培養基中,放線菌和黴菌被篩選為10-2?、10-3、10-4?三種稀釋液分別接種於高氏I培養基和馬丁氏培養基。(壹稀釋壹板)?

5.培養:細菌37℃培養1 ~ 2d,放線菌30℃培養2 ~ 3d,黴菌30℃培養3 ~ 5d?,觀察。?

6.計數:用稀釋水樣檢測板菌落計數法計數,報告細菌總數/(cfu mL-1)?

7.純化:選擇典型菌落,接種於相應平板上。培養條件同上,培養純化。

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