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質譜流動——質譜和流動技術的完美結合

CyTOF質譜流式細胞儀以重金屬同位素為抗體標記,利用質譜技術對細胞蛋白質進行定量檢測。

壹方面,該技術的應用大大增加了流量檢測通道的數量至數百個,提高了從單個樣本獲得的信息量;另壹方面,避免了通道間信號的幹擾,大大簡化了實驗設計,提高了數據的可靠性。

通道的增加意味著細胞亞型的分組更加準確,細胞內信號通路的分析更加全面。單個實驗可以捕獲數百萬個單細胞,避免遺漏小的子集。廣度和深度的結合,

質譜已成為單細胞水平蛋白質組學研究不可或缺的工具。

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Helios質譜流動系統具有極高的信號分辨率,可以同時檢測數百種不同的標簽。質譜流可以同時獲得單個細胞表面標誌物、細胞內信號通路、轉錄因子、細胞因子、細胞周期等信息,廣泛應用於造血、免疫、幹細胞、腫瘤、藥物篩選等多個領域。

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從抗體面板設計到數據分析,每壹步都經過了科學細致的設計,以確保高質量的研究結果。

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常見問題

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(2)檢測系統不同:前者采用激光和光電倍增管作為檢測手段,後者采用ICP質譜作為檢測手段。

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(2)通道間沒有幹擾,不需要計算補償。

(3)采用獨特金屬標記抗體。由於細胞本身不含這些金屬元素作為標記,沒有傳統的流式“自體熒光”,所以信號背景極低。

(4)多樣化的數據處理方式,實現對樣本的深度分析。

Q

(1)PBMC細胞的分離。建議使用肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑提取全血,並在4小時內通過Ficoll或Percol密度梯度離心分離PBMC。註意要盡量去除紅細胞;

(2)順鉑染色。順鉑可用於區分死細胞和活細胞。建議加入1 uL終濃度為5 uM的順鉑,37℃孵育5分鐘,然後加入2~5倍體積的細胞染色緩沖液終止反應。然後以300 g的速度離心5分鐘,棄去上清液,再用細胞染色緩沖液或細胞培養液懸浮細胞。

(3)細胞刺激(可選)。細胞在培養箱中培養65438±05 ~ 30min,然後用相應的刺激物分組刺激。將刺激的細胞轉移至離心管,並稀釋至1mL;離心後使用細胞染色緩沖液。註意:根據具體需要,可按上述步驟進行短期信號通路刺激;如果妳做細胞內細胞因子幾個小時,這壹步應該放在順鉑染色之前。

(4)細胞固定。用2倍固定緩沖液(含3.2% PFA的PBS)固定;

(5)將固定的樣品保存在-80℃下。

靶向YAP依賴性MDSC浸潤削弱腫瘤進展

雜誌:癌癥發現

影響因子:19.45

出版單位:德克薩斯大學安德森癌癥中心

發布日期:2016 1月。

研究背景

前列腺癌細胞與腫瘤浸潤性免疫細胞之間信號轉導機制的研究可能會開辟新的治療方法。

第三,研究成果

1.采用質譜流式細胞儀分析17表面標誌物,分析腫瘤組織中免疫細胞亞群的組成及其隨時間的變化趨勢。

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圖1組間平均貝塔差火山圖

2.紅色代表骨髓源性抑制細胞(MDSC),MDSC的比例隨時間明顯增加,提示MDSC在腫瘤發生中起重要作用。

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研究結論

在這項研究中,通過質譜分析研究了PTEN和Smad4缺失的前列腺癌模型。發現腫瘤浸潤性免疫細胞主要由MDSC組成,且比例隨著腫瘤的發展而增加。如果去除這部分細胞,病程就會得到抑制。

閱讀原文:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4707102/

首先將表型相似的細胞聚類成小群體,然後根據每個小群體的表型相似性進行聚類分析,最後得到壹個樹形圖。

每個結節由壹組表型相似的細胞組成,結節的相對位置不同也反映了它們的表型差異。

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在盡可能保留信息的基礎上,將多維信息壓縮成二維,使高維數據的結構可以用二維散點圖顯示出來。

可以看出,在viSNE圖譜中,幾個主要的免疫亞群是分開聚類的。

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Wanderlust會根據排列位置賦予每個細胞壹個Wanderlust值,其大小反映了分化的程度。

以B細胞為例,其中0代表起點(造血幹細胞),1代表終點(免疫B)。值越小,單元越原始。

有了這個工具,我們可以觀察到B細胞分化過程中任何蛋白質的表達變化,這些信息可以幫助我們發現分化過程中的壹些重要事件。

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對質譜不同時間點的流量數據進行降維分析,得到的圖譜反映了細胞表型隨時間的變化。

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臨床樣本具有很大的異質性,規律性和代表性的差異往往只存在於少數亞組中。柑橘可以分析和識別這些特征亞群。

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聚類熱圖可以簡單的聚合大量數據,直觀的展現數據出現的頻率。

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用於呈現數據點的分布以及兩個元素之間的相關性。

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原始:細胞因子-結果

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