細菌的分離培養是兔場實驗室診斷中非常重要的壹步。通過細菌的分離和純培養，可以根據菌落的形態、大小、結構、顏色、氣味、溶血等進行初步鑒定，然後通過進壹步的染色鏡檢或特殊培養進行鑒定或研究，為病原體的診斷提供依據。
1.培養基制劑是細菌學檢驗過程中非常重要的材料，它含有細菌生長所必需的營養物質。只有在培養基中培養細菌後，才能對其進行準確檢查
細菌的分離培養是兔場實驗室診斷中非常重要的壹步。通過細菌的分離和純培養，可以根據菌落的形態、大小、結構、顏色、氣味、溶血等進行初步鑒定，然後通過進壹步的染色鏡檢或特殊培養進行鑒定或研究，為病原體的診斷提供依據。
1.培養基制劑是細菌學檢驗過程中非常重要的材料，它含有細菌生長所必需的營養物質。只有在培養基中培養細菌後，才能對其進行準確檢查並獲得可靠的結果。
(1)肉水的制備:
①材料:500克瘦牛肉，1000毫升蒸餾水(或普通水)。
②方法:將瘦牛肉去脂去筋，切塊或絞碎，按1kg牛肉加2000ml水的比例加水浸泡壹夜，煮沸壹小時，用紗布初步過濾肉渣，擠出肉水，再用濾紙過濾，補足原水，放入燒瓶中，用120℃高壓滅菌器滅菌20分鐘，制成肉水。
另壹種制作肉水的方法是:取牛肉膏0.5-1.0g，加入蒸餾水100ml，加熱溶解，用濾紙過濾，滅菌同上。
③用途:制作各種培養基的基礎。
(2)營養肉湯:
①材料:肉水1000ml，蛋白腖10g，氯化鈉5g。
②方法:肉水中加入蛋白腖和氯化鈉，微加熱溶解，用氫氧化鈉溶液調節pH值至7.4-7.6，再加熱使溶液均勻。過濾，分裝，高壓滅菌備用。
③用途:可用於壹般細菌生長需要，檢查細菌生長性能，也可作為制作固體培養基的依據。
(3)營養瓊脂:
①材料:營養瓊脂粉40g，蒸餾水1000ml。
②方法:將營養瓊脂粉加入蒸餾水中，攪拌浸泡65，438±0小時，加熱至完全溶解，高壓滅菌備用。
③用途:分離細菌的純培養及作為其他特殊培養基的基礎。
(4)血瓊脂培養基:
①材料:去纖維蛋白血5-10 ml，營養瓊脂100 ml。
方法:準備壹個裝有玻璃珠的無菌三角瓶，無菌采血，註入三角瓶中，不斷搖動直至血液纖維分離，壹般需要10分鐘。
高壓滅菌營養瓊脂融化後，待其冷卻至55-60℃時，加入去纖維蛋白血液。註意無菌操作。加入血液後，輕輕搖勻以避免產生氣泡，立即將其倒入無菌盤中或分裝在無菌試管中備用。
③用途:觀察細菌溶血情況。有些細菌需要這種培養基進行第壹次分離。
(5)厭氧肝切片肉湯:
①材料:營養肉湯、動物肝塊或肉渣、液體石蠟。
②方法:用少量肉末、肉渣或動物肝臟作為肉湯，分裝於試管中，加入5 ml營養肉湯，上層加入0.5-1.0 ml液體石蠟，120℃滅菌20分鐘。
③用途:厭氧菌的培養。
(6)麥康凱瓊脂:
①材料:麥康凱瓊脂粉38g，蒸餾水1000ml。
②方法:將麥康凱瓊脂粉加入蒸餾水中，攪拌浸泡1h，加熱至完全溶解，高壓滅菌備用。
③用途:常用於大腸桿菌的分離培養。
2.細菌接種法
(1)平板劃線接種法:平板劃線接種法是細菌分離培養中最常用的方法，可使細菌分散生長，形成單菌落。左手握住培養皿，拇指、食指、中指以不超過20度的角度揭開。右手握住接種環，接種環與瓊脂表面成45度左右的角度。在培養基邊緣塗抹少許病料，對接種環進行火焰滅菌，冷卻後觸摸培養基邊緣的病料區域，向壹側畫壹條水平線，這樣就可以連續畫出壹個小區，對接種環進行火焰滅菌，冷卻後，改變平板的角度，從第壹個小區向外畫壹個小區，再用同樣的方法畫平板，註意只能在初始位置越過前壹個小區。
(2)瓊脂斜面接種法:此法多用於菌種的保存，也可用於細菌的分離。左手拿斜面培養基，右手拿接種環。火焰滅菌冷卻後，挑出所需菌落，用右手小指捏住棉塞或膠塞，輕輕轉動後取出，註意不要汙染，立即用火焰對噴嘴和塞子進行滅菌，將接種環放入試管中，從斜面底部向噴嘴畫壹條曲線，然後用火焰對噴嘴和塞子進行滅菌並蓋緊，進行培養。
(3)穿刺接種法:此法適用於半固體、固體培養基和微量發酵管的接種，用於細菌的生化和動力學實驗。沿培養管中心穿刺至距管底0.5厘米左右，再沿穿刺線退出接種針。
(4)液體培養基接種法:方法與斜面接種法基本相同。接種環在培養管壁液面下摩擦，然後在液體中振動數次，塞緊塞子。註意塞子和噴嘴的滅菌操作。
3.細菌培養方法
根據細菌的生長特性、培養目的和要求，細菌的培養方法是不同的。主要分為以下幾類:
(1)有氧培養法:壹般培養法。細菌接種到培養基後，在37℃的培養箱中培養。適用於需氧菌和兼性厭氧菌的分離培養。
(2)二氧化碳培養法:某些細菌能在壹定的二氧化碳環境中生長良好。
①蠟燭罐法:將接種後的培養基放入幹燥器中，點燃蠟燭，密封，與容器壹起放入培養箱中培養。
(2)化學法:按每升容器中0.4 g碳酸氫鈉和3.5 ml鹽酸的比例，裝入兩個小容器中，放入幹燥器中，密封後接觸產生二氧化碳。
③二氧化碳培養箱法:培養基在專用的二氧化碳培養箱中培養，可根據需要調節二氧化碳的濃度。
(3)厭氧培養法:
①通風法:將培養基放入幹燥器中，將幹燥器抽真空，然後充入氮氣、氫氣和二氧化碳的混合氣體，置於培養箱中培養。
②焦性沒食子酸法:焦性沒食子酸在堿性溶液中形成焦性沒食子酸鹽，能吸收空氣中的氧氣，從而創造厭氧環境，適合厭氧菌的生長。培養方法:去掉培養皿的蓋子，翻過來，放上焦性沒食子酸1g，然後蓋上壹層脫脂棉，在脫脂棉上滴上1ml的IO%氫氧化鈉，然後蓋上翻過來的蓋子，迅速用蠟封好，放入37℃培養箱中2-4天，觀察結果。如果接種的培養基是試管，取壹個大試管，底部放2g焦性沒食子酸，加入10以上的玻璃珠，將培養基試管放在玻璃珠上，然後沿試管壁滴加2ml 10%氫氧化鈉溶液，用橡皮塞塞住試管口，放入37℃培養箱中培養。
③在肉湯中接種厭氧肝切片:由於肝切片或肉渣中含有谷胱甘肽，可發生氧化反應，從而降低環境中的氧化勢能，有利於厭氧菌的分離。接種方法是用接種環鉤取病料，接種到培養基中，在37℃培養箱中培養2-4天，觀察結果。