常用鹽水凝集法檢測紅細胞上存在的血型抗原,以及血清中存在的血型抗體,依據抗原抗體存在的情況判定血型。常規的方法有:①正向定型:用已知抗體的標準血清檢查紅細胞上未知的抗原。②反向定型:用已知血型的標準紅細胞檢查血清中未知的抗體。結果判定:凡紅細胞出現凝集者為陽性,呈散在遊離狀態為陰性。ABO血型定型原則見表1-5-2。
2.鑒定方法
(1)生理鹽水凝集法:①玻片法:操作簡單,適於大量標本檢查,但反應時間長;被檢查者如血清抗體效價低,則不易引起紅細胞凝集,因此,不適於反向定型。②試管法:由於離心作用可加速凝集反應,故反應時間短,而且,借助於離心力可以使紅細胞接觸緊密,促進凝集作用,適於急診檢查。
紅細胞亞型抗原性弱,如抗A抗B標準血清效價低時,易造成漏檢或誤定。如加用O型(抗A、B)血清和反向定型,可避免此類錯誤。
玻片法凝集結果判斷:紅細胞呈均勻分布,無凝集顆粒,鏡下紅細胞分散。在低倍鏡下凝集程度強弱判斷標準:①呈壹片或幾片凝塊,僅有少數單個遊離紅細胞為(++++)。②呈數個大顆粒狀凝塊,有少數單個遊離紅細胞為(+++)。③數個小凝集顆粒和壹部分微細凝集顆粒,遊離紅細胞約占1/2為(++)。④肉眼可見無數細沙狀小凝集顆粒。於鏡下觀察,每凝集團中有5~8個以上紅細胞凝集為(+)。⑤可見數個紅細胞凝集在壹起,周圍有很多的遊離紅細胞(±)。⑥可見極少數紅細胞凝集,而大多數紅細胞仍呈分散分布為混合凝集外觀。⑦鏡下未見細胞凝集,紅細胞均勻分布為(-)。
(2)凝膠微柱法:是紅細胞抗原與相應抗體在凝膠微柱介質中發生凝集反應的免疫學方法。血型抗體為單克隆抗體,加入試劑、標本,用專用離心機離心後可直接用肉眼觀察結果或用血型儀分析。此法操作標準化,定量加樣,確保結果準確性。
3.抗A、抗B和抗AB標準血清標準
準血清均采自健康人,並應符合下述條件:①特異性:只能與相應的紅細胞抗原發生凝集,無非特異性凝集。②效價:我國標準抗A和抗B血清效價均在1:128以上。③親和力:我國標準要求抗A對A1、A2及A2B發生反應開始出現凝集的時間分別是15s、30s和45s;抗B對B型紅細胞開始出現凝集的時間為15s。凝集強度為3min時,凝塊不小於1mm2。④冷凝集素效價:在1:4以下。⑤無菌。⑥滅活補體。