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酵母菌分類

1.酵母菌的分類鑒定原則

公元前6000年埃及就有釀造酸啤酒的記錄,公元前1000年埃及和中國對使用酵母菌釀酒,制作面包的技術已相當成熟,直到1860年丹麥的酵母專家Emil Christian Hansen首先對酵母菌進行分類研究,他成為研究酵母菌的創始人.以後人們提出了多種分類方法並不斷改進,其中比較著名被人們普遍接受的是1983年Lodder和Barnett對酵母菌進行了系統分類方法,以後被人們廣泛采用,直到現在人們壹直使用這種分類方法,其原則步驟是:

第壹步:是否具有有性生殖過程,能否形成子囊孢子,具有擲孢子或冬孢子,以及孢子的形狀,特點,數目以及能否形成真假菌絲分類到綱,目,科.

第二步:根據菌落形態,細胞形狀,增殖方式是否形成真假菌絲,結合少數糖類發酵和硝酸鹽利用等試驗分類歸屬.

第三步:根據生理特征,其中糖的發酵和同化試驗最為重要,利用硝酸鹽分類到種.

2.酵母樣菌的檢驗方法:

(1)直接塗片鏡檢: 尋找孢子或菌絲,如尿液常規觀察細胞時也可直接尋找典型的孢子,菌絲根據形態而確定.

(2)氫氧化鉀法: 百分之十KOH溶液透明標本,破壞其中的紅,白細胞,上皮細胞,使視野更為清晰,容易辨認.

(3)革蘭氏染色: 塗片革蘭氏染色尋找藍紫色的孢子或菌絲.註意報告時,最好能寫明檢出孢子還是菌絲及孢子伴有菌絲因為對於大部分酵母樣真菌菌絲狀態致病性更強.

(4)墨汁負染法: 主要觀察新型隱球菌的莢膜,出現典型的結構,形態而確定.

(5)培養: 沙苞氏培養基是最常用的真菌培養方法,最好有兩種溫度25c,37c,培養48小時或5天觀察菌落生長情況.(6)鑒定程序:

絲狀真菌根據菌落形態,菌體形態,進行鑒定.

酵母樣真菌,首先菌落外觀,再做芽管試驗玉米粉吐溫80觀察真假菌絲,芽生孢子,再進行糖同化試驗,糖發酵試驗,硝酸鹽利用試驗,尿素分解試驗綜合分析,有條件的單位在生化反應基礎上可用因子血清進行玻片凝集試驗,分類出念珠菌和光滑球擬酵母菌.對於念珠菌還有分子生物學方法PCR技術進行基因分型鑒定,可用於病原學診斷及流行病學追蹤調查作用.

3.病原性真菌分類鑒定的進展

(1)(1-3)-β-D-葡聚糖定量測定: 真菌感染時,患者血中此成分升高,其含量與黴菌的活動呈平行關系.

(2)化學分類法與計算機技術的結合: 此法大大提高了鑒定技術的準確性,主要是利用編碼數值來進行鑒定.

(3) 基因分類法: 限制性內切酶多態性分析技術: (RFLP)根據真菌 DNA順序上發生突變獲得或丟失某限制性內切酶識別位點,從而在酶作用後限制性片段的長度發生變化,而進行分型研究。

基因探針和PCR法:人們發現酵母菌在進化過程中,它的rDNA具有很強的保守性,可利用它作為通用片段,可利用它作為真菌感染診斷,同時人們發現其兩側存在種屬特異性片段,人們設計出種屬特異性引物,PCR擴增進行有效的分類鑒定,此為隨機PCR技術(RAPCR).分子生物學分類方法克服了傳統表型分類方法程序煩瑣,觀察有誤差,分型粗糙,易突變,重復性差缺點等,所以分子生物分類方法的應用勢在必行.

(4)染色題DNA的分離: 利用外周弧電極均勻電泳系統(CHEF)分離酵母菌的染色體DNA,根據其核型進行分類鑒定

4.酵母樣菌的的藥敏實驗:

抗真菌藥有灰黃黴素,氟康唑,酮康唑,伊由康唑,特比萘芬,這些藥物多依臨床資料作為應用的依據,因為 NCCLS標準還沒有完全確定所以藥敏結果標準不壹,只供臨床參考使用.它的實驗室藥敏試驗相對滯後.由於其藥液在瓊脂中不能很好的擴散,培養時間較長等原原因,所以多不采用瓊脂擴散方法,而采用肉湯稀釋法進行MIC值測定.此法應用儀器法比較方便.

還可以下載這個文檔參考:http://faculty.stut.edu.tw/~c5200999/%C1%BF%B8q/04%20%BB%C3%A5%C0%B5%DF%A4%C0%C3%FE.doc

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