當前位置:吉日网官网 - 傳統文化 - 鏈終止法測序dna的基本過程?

鏈終止法測序dna的基本過程?

鏈終止法測序(Sanger測序)是壹種常用的DNA測序方法,以下是其基本過程:

DNA模板準備:首先,需要獲得待測序的DNA樣本並純化。通常使用PCR或細菌培養等方法擴增DNA片段,以獲取足夠的模板。然後,通過熱變性使得DNA變成單鏈。

標記引物合成:在DNA模板的末端,使用DNA聚合酶和二進制核苷酸(ddNTPs)進行DNA合成。其中,ddNTPs是普通二進制核苷酸(dNTPs)的缺氧衍生物,與dNTPs類似,但它們在3'-OH末端沒有3'-OH上的羥基,因此會使DNA鏈延伸終止。

反應分割:將合成的DNA片段通過凝膠電泳分離。DNA片段根據長度進行分離,並根據終止堿基類型(ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP)的不同而產生顏色差異。

凝膠電泳:將反應產物註入聚丙烯酰胺凝膠,然後通過施加電場使DNA片段沿凝膠移動。由於凝膠中的孔隙大小不同,較短的DNA片段移動得更快,而較長的片段移動得更慢。

電泳結果分析:通過適當的檢測方法,如熒光標記或放射標記,觀察凝膠中DNA片段的分布情況。不同的堿基會產生不同的顏色或放射強度,因此可以確定DNA序列。

數據分析:通過分析凝膠電泳圖像上的帶狀圖案,可以確定DNA片段的順序和長度。根據帶的相對位置和顏色,可以推斷DNA的堿基順序。

鏈終止法測序是通過使用復制DNA鏈時終止堿基的特性,結合凝膠電泳技術,來確定DNA序列的壹種方法。

  • 上一篇:重慶市公墓的地點選擇
  • 下一篇:除了茅臺酒,還有什麽值得推薦的醬香型白酒?
  • copyright 2024吉日网官网