生物檢測法包括:
(1)生物毒性試驗法。小鼠生物法是AOAC推廣的檢測麻痹性貝類毒素的標準方法,是國際上都能接受的唯壹的方法。該方法在檢測樣本總毒性方面相當成功,但是無法準確定性樣本中單個毒素。此外,還有家蠅生物分析法、蝗蟲生物分析法。上述3種生物分析技術原理相似。
(2)細胞毒性試驗法。石房蛤毒素具有Na+通道阻滯劑的特性,可拮抗箭毒、藜蘆堿的作用,以減少或“解救”細胞形態的改變及細胞裂解死亡,且該拮抗或“解救”作用與毒素的量呈對應關系。根據該對應關系可以計算出毒素的含量。早期建立的方法是用顯微鏡計數活細胞數以檢測PSP毒素的量,但試驗時間長,操作繁瑣,所需細胞量大。
在該原理之上發展起來壹種STX的快速診斷裝置MIST,已成功用於酸性粗毒中PSP總毒性的測定及STX、neoSTX、GTX和dcSTX相關毒性的測定,該裝置的靈敏度高,檢測迅速且無需組織培養的設備及專業知識。
(3)免疫分析技術。隨著抗STX抗體的獲得,免疫分析技術如血球凝聚反應、放射免疫分析(RIA)和酶聯免疫分析(ELISA)等逐漸發展起來,其中直接競爭ELISA法是最常用的壹種方法,檢測限可達3pg/ml,間接ELISA的檢測限也可達到10pg/ml。
免疫方法靈敏度高,方便迅速,但抗體的獲得是其關鍵,各毒素的交叉反應低,不能完全體現樣品的毒性來源。
(4)受體分析法。即固相受體結合法(solid-phasereceptorbindingassay),主要是根據PSP毒素能與Na+通道蛋白質結合的特點,應用同位素標記以檢測PSP類毒素的量,具有快速、可靠、準確的特點。
Llewellyn等以壹種特異結合STX的類似轉鐵蛋白Saxiphilin代替Na+通道蛋白質,其對STX的鑒定具有專壹性,從而與TTX的鑒定相區別。
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