魯道夫對當時的藝術和科學表現出濃厚的興趣。他同天文學家第谷·布拉赫和約翰內斯·開普勒聯系密切，先後任命他們為皇家天文學家編制星行表。後來開普勒在第谷·布拉赫觀測資料的基礎上，於1627年發表了可以用來計算太陽、月亮和行星的運動的《魯道夫星行表》。
魯道夫是同時代最大的收藏家之壹，他的藝術收藏具有傳奇色彩，維也納藝術史博物館中布勒哲爾的畫作大多出自他的收藏，他是風格主義畫作的重要收藏者，還對石刻藝術情有獨鐘，他的石刻收藏在1648年布拉格之役時被瑞典人劫掠，如今散落到了世界各地。魯道夫1602年命人完成的皇室皇冠在1804年成為了奧地利的皇冠。
魯道夫經常邀請畫家作畫，由此形成了“魯道夫繪畫圈”，其中包括漢斯·馮·阿亨（Hans von Aachen）、朱塞佩·阿爾欽博托（Giuseppe Arcimboldo）、巴托洛莫斯·斯普蘭格（Bartholomäus Spranger）和約瑟夫·海因茨（Joseph Heintz）。他同時也熱衷於雕塑藝術和金匠。