劃線分離是壹種常見的微生物分離純化方法，其操作步驟如下:
工具材料準備:劃線分離需要在無菌環境下進行，需要準備無菌接種環、針頭、酒精燈、無菌培養皿、無菌棉簽等工具，以及無菌細菌培養基和待分離菌株。
酒精燈的點燃:手術前，需要點燃酒精燈，提供無菌環境所需的熱量。
線接種:用無菌棉簽蘸取待分離的菌株，然後輕輕壓在無菌培養皿的培養基表面，使菌株附著在培養基上。然後用接種環或針將菌株劃線或接種在培養基上，接種通常用“+”或“++”等不同形狀劃線進行。
培養觀察:將接種後的培養皿放在恒溫箱中進行培養，壹般需要壹段時間(如24-48小時)觀察菌株的生長情況。
單菌落選擇:在培養過程中，可以看到不同形狀和顏色的單菌落。用無菌接種環或針選擇單菌落，並接種到新的培養皿中。
重復劃線分離:對於需要進壹步純化的復雜菌群或菌株，可能需要重復上述步驟進行多次劃線分離，以獲得更純的菌株。
保存菌株:最後，將純化的菌株保存在合適的環境中，以備後續研究或應用。
需要註意的是，線分離的操作需要嚴格的無菌操作技能和實驗條件的控制，以保證獲得純化的菌株，避免汙染。此外，對於不同的菌株和實驗要求，可能需要進行適當的調整和優化操作步驟。