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中國蘭花的組織培養和快速繁殖技術

中國蘭花又稱東方蘭花,是蘭科的陸生蘭花,是蘭科植物龐大家族中的獨特稀有物種。是我國傳統名花,花美、香雅,具有很高的觀賞和經濟價值。其中寶藏眾多,千金難求。然而,傳統的分株繁殖繁殖系數很低,植株大量感染,物種退化。種子缺乏胚乳和子葉,胚發育不完全,常規播種很難發芽。組織培養和快速繁殖技術的應用是發展和壯大我國蘭花產業的有效途徑。1.中國蘭花莖尖和側芽的組織培養技術。取樣、消毒、接種為了最大限度地減少樣品蘭花攜帶的病菌,要采取特殊的管理措施,如放置在透光的遮蔽物中,不施有機肥,新芽初出時將芽暴露在土壤表面。剪掉6~13cm的芽苗,用鋒利的刀片去除2~3根、汙物和包裹的葉子,徹底洗凈。從材料上切下2~3cm,在10%次氯酸鈉溶液中滅菌10分鐘。如果細菌嚴重,用0.1%氯化汞和飽和漂白粉上清液交叉滅菌。滅菌後用無菌水沖洗數次,然後放在滅菌濾紙上吸幹水分,再在解剖顯微鏡下剝離莖尖和腋芽。出於去除病毒的目的,莖尖應在0.2mm以下,否則2mm以上的莖尖可用兩個元葉基部剝離,有利於成活。原球莖誘導莖尖的誘導率和成功率高於側芽。新芽長度的最佳選擇方法是選擇長度為9 ~ 1.3 cm的新芽,無論是莖尖還是側芽。芽的誘導成功率最高。培養基的選擇因品種而異。蘭花品種,白1 mg/L 6芐基腺嘌呤5 mg/L NAA8.5%椰奶;或b 111mg/L L6芐基腺嘌呤2mg/L萘乙酸。對於“夏回”和“秋酥”,MS0.5mg/L6芐基腺嘌呤1mg/LNAA0.5%活性炭培養基效果最好。接種後,蘭花外植體在23~25℃的黑暗中培養。1~2個月後,它們可以分化成壹個或幾個乳白色的原球莖。解剖顯微鏡下觀察到桑葚狀原球莖,然後變成綠色。培養後成為根莖。我國的蘭花經原球莖誘導後容易褐變死亡,有時死亡率高達3/4。為此,采取了接種大塊外植體、降低培養溫度、采用暗培養、減少創面、添加褐變抑制劑等綜合措施。)在培養基中或使用活性炭時,應采取措施減少褐變的不利影響。接種3~6個月後,原球莖的莖尖和側芽可在根莖形成期進行分裂和繼代培養。白色或B11為增殖的基本培養基,以含NAA的1~2mg/L液體培養基為宜。放在慢轉床上光照培養,每15天更換壹次培養基,連續繼代培養3~4次,然後轉到相同成分的固體培養基上,加入活性炭和檸檬酸,每月繼代培養壹次。液體培養和固體培養交替進行。增殖時原球莖的分裂不能太小,培養組不能太小,培養液不能太多,繼代培養時間不能太長。否則原球莖就長不好,甚至會死掉。育苗和育苗。將原球莖轉移到含B523mg/L6芐基腺嘌呤和0.2mg/L萘乙酸的瓊脂培養基上,置於25℃左右,光照強度為1000 L·L,芽和根能迅速分化形成完整的小植株。當幼苗長到2~3cm時,應及時轉移到B52mg/LNAA0.3%活性炭培養基上,使根和芽按比例正常生長。大試管適合壯苗培養,放在28°左右,光照強度2,000le,每天光照12小時。當苗高超過12cm時。

種子的消毒預處理:取8-9年生的研磨蘭花蒴果,用酒精棉擦去果表面的汙垢,用消毒刀片切開蒴果,取出種子,用細白布包裹。用無菌水浸泡使其膨脹,然後用無菌濾紙吸去多余水分,用0.1mol/L氫氧化鉀溶液預處理5~10分鐘,用無菌水沖洗3次。無菌濾紙吸水後,放入飽和漂白粉上清液中消毒10分鐘。氯化汞、次氯酸鈉和漂白粉對種子表面的消毒效果優於雙氧水。氯化汞對原球莖生長有不利影響,次氯酸鈉和漂白粉能明顯促進種子萌發和原球莖生長。常用的播種介質有Knudson、VacinWent、White、B11等。B11或白色1mg/l6芐基腺嘌呤1mg/l NAA 0.3%活性炭培養基是紫莖澤蘭種子的最佳培養基。雜交種子的最佳培養基為B111mg/L6芐基腺嘌呤1mg/L NAA。萘乙酸能提高蘭花種子的發芽率,但發芽後死亡數量增加。如果與6芐基腺嘌呤合用,效果更好。添加活性炭還可以大大降低發芽種子的死亡率,尤其是提高陸生蘭花的發芽率。而活性炭對陸生蘭花和氣生蘭花雜交種子的萌發有明顯的抑制作用。原球莖培養的蘭花種子,無菌培養,萌發成白色原球莖,再發育成綠色原球莖。原球莖在25℃左右的弱光下培養,轉移到2 mg/LNA5%椰奶和0.2%活性炭的白色培養基上,可以大量增殖。B52.5mg/L6芐基腺嘌呤0.2mg/L NAA是成熟壯苗根芽分化的最佳培養基。B5是壯苗的最佳培養基。試管苗的移栽和養護。蘭花試管苗自力更生能力差,移植困難。成功移栽和養護的關鍵技術是:打開試管塞,煉苗3-4天,取出幼苗,清洗粘在根部的培養基,最大限度地減少根系損傷。幼苗幹燥後,種植在通風、透氣、保濕的介質中。高溫弱光緩苗6-10天,然後保持在15-25,空氣相對濕度80%左右。註意定期補充營養液。

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