實驗原理:某些化學試劑能使生物組織中的相關有機化合物產生特定的顏色反應。
1.可溶性還原糖(如葡萄糖、果糖、麥芽糖)與費林試劑反應生成磚紅色的Cu 2O沈澱,即Cu (OH) 2被還原成Cu 2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
2.脂肪可被蘇丹紅ⅲ染液染成橙色(或被蘇丹紅ⅳ染液染成紅色)。
3.蛋白質與縮二脲試劑反應產生紫色反應。(蛋白質中含有許多肽鍵,在堿性NaOH溶液中能與縮二脲試劑中的Cu2+反應,產生紫色反應。)
澱粉遇到碘會變成藍色。
三。實驗材料
1.在可溶性還原糖的鑒定實驗中,應選擇含糖量高的白色植物組織,如蘋果、梨等(因為組織顏色淺,容易觀察)
2.做脂肪識別實驗。妳要選擇富含脂肪的種子,尤其是花生種子,實驗前要浸泡3-4小時(蓖麻種子也可以)。
3.做蛋白質的鑒定實驗,可以用富含蛋白質的大豆或蛋清。
四、實驗試劑
林飛試劑(包括溶液A:質量濃度為0.1g/ml的NaOH溶液和溶液B:質量濃度為0.05g/ml的CuSO4溶液)、蘇丹ⅲ或蘇丹ⅳ染料溶液、縮二脲試劑(包括溶液A:質量濃度為0.1g/ml的NaOH溶液和溶液B: 0.01g/ml)。
動詞 (verb的縮寫)方法步驟:
(A)可溶性糖的鑒定
1.準備組織樣本溶液。
蘋果或梨的組織液壹定要臨時準備,因為蘋果多酚氧化酶含量高,組織液容易氧化成褐色,掩蓋了顏色。
2.註射2mL組織樣本溶液。
3.註入1毫升新制備的菲試劑,搖勻。
(備用,先混合後添加)
組成林飛試劑的溶液A和溶液B應分開配制和儲存,使用前應配制好溶液A和溶液B。
將B液等量混合均勻,形成桑黃試劑;不要在蘋果組織樣本溶液中加入溶液A和溶液B進行測試。
費林試劑非常不穩定。當液體A和液體B混合儲存時,生成的Cu (OH) 2在70-900℃分解成黑色CuO和水;當溶液A和溶液B分開加入時,它們可能與組織樣本溶液反應,沒有
形成了Cu (OH) 2。
4.水浴加熱:將試管放入盛有50-650C溫水的大燒杯中,加熱2分鐘左右,觀察溶液顏色:淺藍色→棕色→磚紅色(沈澱)。
最好用試管夾夾住試管上部,使試管底部不接觸燒杯底部,試管口不朝向實驗者。
也可以直接用酒精燈加熱試管。
防止試管內的溶液沖出試管造成燙傷;
縮短實驗時間。
(2)脂肪的鑒定
取樣切片制作:將花生種子浸泡,去皮,切下部分子葉切片,放入載玻片的水滴中,用吸水紙吸幹切片中的水分。
幹種子要浸泡3-4小時,新花生浸泡時間可縮短。
浸泡時間短,不易切片,浸泡時間過長,組織較軟,切片不易成型。切片要盡可能薄,便於觀察。
染色:在子葉切片上滴2-3滴蘇丹ⅲ或蘇丹ⅳ染料溶液(染色3分鐘)。
染色時間不宜過長。
漂洗:用吸水紙吸幹薄片周圍的染料,用50%酒精洗去浮色,吸幹酒精。
用酒精洗去浮色,會影響橙色脂肪滴的觀察。同時,酒精是脂溶性溶劑,可以將花生細胞中的脂肪顆粒溶解成油滴。
用吸水紙吸收薄片周圍的酒精,滴入1-2滴蒸餾水,並用蓋玻片覆蓋。
滴上清水可以防止覆蓋玻璃時形成氣泡。
顯微鏡:先低倍,再高倍(高倍使用:逆時針移動物體)。低倍鏡下可看到花生子葉片最薄的部分,細胞內可見染成橙色或紅色的圓形小顆粒。
這部電影不應該放很長時間。
隨著時間的推移,油滴會溶解在乙醇中。
第三,蛋白質的鑒定
準備組織樣本溶液。(浸泡、去皮、研磨、過濾。)浸泡黃豆1到2天,容易磨成漿。也可以買鮮豆漿,節省實驗時間。向試管中加入約2ml樣品溶液,加入縮二脲試劑A,搖勻。加入3-4滴縮二脲試劑B溶液,搖勻直至溶液變成紫色。
溶液A和溶液B也應分開制備和儲存。鑒別時先加溶液A,後加溶液B。
CuSO4溶液不能多加。
首先,加入NaOH溶液從蛋白質中提取Cu2+。
對於堿性環境。混合加載或同時添加溶液A和溶液B會導致Cu (OH) 2沈澱和失效。
否則CuSO4藍會掩蓋反應的真實顏色。可以用蛋清代替豆漿。蛋清要先稀釋。
如果稀釋不夠,實驗中蛋清會粘在試管壁上,與縮二脲試劑反應後會粘在試管內壁上,導致反應不容易徹底,試管也不容易清洗。
附:從試管中取2ml待測組織樣本溶液進行澱粉檢測觀察,在試管中滴入2滴碘,觀察顏色變化。不要滴太多碘,以免影響顏色觀察。