(營養瓊脂，121℃高壓滅菌20min，37℃培養48h)
1.兩種方法
(1)沖擊法(兩級或六級微生物采樣器)
(2)自然沈降法(暴露5min)
采樣:梅花分布，高度:1.2 ~ 1.5m；離墻:1m。
二、茶具微生物檢驗方法
(1)細菌總數
1.生理鹽水的配制:將氯化鈉(8.5g)溶於蒸餾水(1000mL)中，分裝於試管中，在10mL，121℃下對每支試管滅菌20min。
2.取樣:用生理鹽水濕潤棉簽，在茶具內外緣各塗50cm2，即口與唇接觸點壹圈(1~1.5cm)，用無菌剪刀剪去棉簽手接觸點，4小時內將棉簽放入10mL生理鹽水中檢驗。
3、檢驗程序:
樣品檢測→加入兩塊無菌平板(汙染嚴重的話可以稀釋10倍)至1mL每塊→37℃培養48小時→菌落計數→報告。
4.單位:cfu/cm2。
(2)大腸桿菌
1.培養基:乳糖膽鹽發酵液(雙份，每管10mL，115℃高壓滅菌15min)。
2、檢測方法:發酵法(具體內容教材11頁)
3.樣品檢驗(剩余樣品用於確定細菌總數)
4.革蘭氏染色過程:(陽性細菌為紫色，陰性細菌為紅色)
(1)初染:1min，水洗；
(2)碘染色:65438±0min，水洗；
(3)脫色:30s，水洗；
(4)復染:65438±0分鐘，洗滌，幹燥，鏡檢。
5.結果報告:當乳糖發酵管最終產酸產氣，革蘭氏染色為無芽孢桿菌陰性時，可報告檢出大腸菌群。
三、毛巾、床上用品微生物檢測方法
(1)細菌總數
1.抽樣
(1)毛巾、枕巾:每邊中心25cm2對折後；
(2)床單、床單:上下兩部分中央來回塗抹25cm2
2.檢測程序與茶具細菌總數相同。
3.計算單位:cfu/25cm2。
(2)大腸菌群(檢測程序同茶具)
1.塗抹法:(測定細菌總數時使用采集的樣品)
四、美容器具微生物檢驗方法
(A)大腸桿菌
1，采樣
推子:在推子前部上下均勻塗抹三次；
理發刀、剪刀、修腳工具:在用過的刀、剪刀兩面各塗壹個樣品；兩把刀或兩把剪刀剪成壹個樣品。
2.5mL樣品倒入雙乳糖膽鹽發酵管中，37℃培養24h；
3.分離培養:接種伊紅美藍平板，革蘭氏染色鏡檢；
4.確認試驗:在37℃下接種乳糖發酵管24h，觀察產氣情況。
5.結果報告:革蘭氏染色陰性的無芽孢桿菌細菌可報告為陽性大腸桿菌。
(2)金黃色葡萄球菌
1.培養基:7.5%氯化鈉肉湯或胰蛋白腖大豆肉湯培養基。
2.步驟:
(1)將剩余的大腸菌群5mL倒入培養基中，37℃培養24h；
(2)接種血平板，37℃培養24h觀察形態:圓形，金黃色，凸起，表面光滑，周圍有溶血圈；
(3)挑取菌落鏡檢:革蘭氏陽性(紅色)，呈葡萄狀排列；
(4)甘露醇發酵試驗:接種於甘露醇發酵培養基中，37℃培養24h，觀察是否產酸；
(5)血漿凝固酶試驗
玻片法:在幹凈的玻片兩側，壹端滴壹滴生理鹽水，另壹端滴壹滴血漿，接種有環菌落，分別與之混合。5min後無凝固者為陰性；如果血漿中有顆粒凝塊，而生理鹽水中沒有，則為陽性。
動詞 （verb的縮寫）拖鞋微生物檢驗方法
黴菌和酵母
(玻璃珠應加入生理鹽水中)
1.培養基:黴菌培養基，(虎紅)孟加拉紅培養基，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)。
2.取樣:用棉簽均勻塗抹在每只拖鞋鞋幫與腳趾接觸的5cm×5cm區域，3次，壹雙拖鞋為壹個樣品；
3.用棉簽在手掌中搖動試管100次，分離黴菌孢子；
4.培養:在25~28℃的黴菌培養箱中培養觀察壹周。
5.單位是cfu/50cm2。
六、浴缸、面(腳)盆微生物檢測
(1)細菌總數
無菌生理鹽水:浴缸取樣125mL/瓶；50毫升用於面(腳)盆取樣。取樣位置:盆內1/2至1/3高度；
分布:浴缸梅花分布；面(腳)盆分布在相對的兩個側壁上；
方法:塗抹法(與茶具法壹致)
單位:cfu/25cm2。
(2)大腸菌群(同茶具)
七、遊泳池水微生物檢測
(1)細菌總數
1.取樣瓶:無酸、無堿、無毒的玻璃容器。
2.滅菌前加入足量的10%硫代硫酸鈉溶液，壹般在125mL水樣中加入0.1mL。
第三步:取樣
4.操作步驟(與茶具細菌總數相同)
(2)大腸桿菌
1.培養基:三倍濃縮乳糖蛋白腖培養液(蒸餾水不變，其他成分三倍)。
第二步
(1)推測測試
將100mL水樣加入兩個裝有50mL三倍濃縮乳糖蛋白腖培養液的大試管(帶小試管)中；將10 ml水樣加入裝有5mL三倍濃縮乳糖蛋白腖培養液的10試管(帶小試管)中。搖勻培養。
(2)板塊分離
接種曙紅亞甲藍，培養觀察；典型菌落形態:深紫色或紅紫色，有金屬光澤。
(3)再發酵實驗
革蘭氏染色，乳糖發酵管接種，培養，觀察。
(4)查表:1000mL水樣中大腸菌群的MPN值。
八、飲用水微生物檢驗方法
(1)取樣
1.取樣容器應由清潔、無色、無毒的聚乙烯塑料和硬質玻璃(也稱為硼矽酸鹽玻璃)制成。樣品瓶必須專瓶專用，實驗室內裝過濃溶液的瓶子不得作為樣品瓶使用。通常我們用500ml高壓滅菌細頸瓶取樣。
2 .容器、瓶塞和瓶蓋應能承受滅菌溫度。
檢查中使用的所有物品必須完全滅菌。滅菌前應徹底清洗，121℃高壓滅菌20min，或160℃烘幹2h。
4.冷藏，4小時內檢測。如有遊離余氯，在采樣瓶消毒前，每65438±025ml加入0.65438±0ml硫代硫酸鈉溶液。
(2)細菌總數(操作步驟與茶具相同，記得做空白對照)
(三)總大腸菌群
1.乳糖發酵試驗
(1)將10mL水樣加入10mL雙乳糖發酵管中；將1毫升水樣加入10毫升單乳糖發酵管中；將0.1毫升水樣加入10毫升單乳糖發酵管中；每個稀釋度接種5個試管。
(2)37℃培養24小時，觀察產酸產氣現象。
2.分離和培養(用曙紅亞甲藍接種，培養)
3.確認實驗(革蘭氏染色、鏡檢、乳糖接種發酵管)
4.結果登記:查找表。
(4)耐熱大腸桿菌
1.培養基:EC培養基
2.操作步驟:大腸桿菌多管發酵。
3.培養溫度:44.5℃，24h。
(5)大腸桿菌
1.培養基:EC-MUG培養基(培養基加熱溶解後，需檢查366nm紫光下是否有熒光)。
2.培養溫度:44.5℃，24h。
3.觀察:在黑暗中用366nm紫外燈照射是否有藍色熒光；
4.計算陽性試管的數量，並查表得到最可能的數量。結果報告為MPN/100毫升。
九、公共* *場所中央空調系統
(1)冷凝水和冷卻水中的嗜肺軍團菌
(1)采樣
1.采樣容器:可選用玻璃瓶、聚乙烯瓶、廣口瓶，使用前消毒。
2.取樣量:按照無菌操作，在每個取樣點取約500ml水樣(或沈積物、汙泥等樣品)。
3.中和:對於用氯或臭氧消毒的樣品，在滅菌前，在采樣容器中加入硫代硫酸鈉溶液進行中和。
4.樣品運輸和保存:樣品最好在2天內送到實驗室，不要冷凍，但應避光、避熱，室溫保存不超過15天。
(2)熱處理:取1毫升洗脫樣品，在50℃水浴中加熱30分鐘。
酸處理:取5ml洗脫樣品，調節pH至2.2，輕輕搖勻，放置5min。
(3)接種板置於35~37℃濃度為2.5%的CO2培養箱中。當觀察到培養物時，將平板翻轉，孵育65438±00d，並保持濕潤。
(4)觀察
軍團菌生長緩慢，容易被其他細菌覆蓋，需要每天在立體顯微鏡上觀察。軍團菌菌落有各種顏色，通常為白色、灰色、藍色或紫色，也有深棕色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，表面光滑，是典型的毛玻璃。在紫外燈下，有些有熒光。
(2)空氣供應中的細菌總數
無菌操作中，采用六級篩網空氣沖擊采樣器，空氣流速為28.3L/min，采樣點采集時間為5~15min。收集細菌後，在營養瓊脂平板上於35~37℃培養48 h，計數菌落數。
(3)空氣供應中的真菌總數
采樣方法同上。將采集的真菌在夏克瓊脂培養基中於28℃培養5 ~ 7天，每天觀察並在第7天記錄結果。如果真菌數量過多，可在第五天統計結果，記錄培養時間並換算成cfu/m3。
(4)氣源中的β-溶血性鏈球菌
在血瓊脂平板上形成表面灰色、凸起、直徑0.5mm~0.7mm的微小菌落，透明或半透明，表面光滑乳白色，菌落周圍有溶血環。顯微鏡下，它是革蘭氏陽性無芽孢桿菌，圓形或橢圓形，呈鏈狀排列。
(5)風管內表面的微生物檢查
取樣面積:每個點的取樣面積應為50cm2。
取樣方法:刮塗法和擦拭法。
細菌和真菌的培養和計數方法同上。