1.了解血細胞計數板的結構和用法。
2.學會用血細胞計數板計數酵母細胞。
二、基本原則
顯微鏡下用血細胞計數板直接計數微生物是壹種常用的方法。這種方法的優點是直觀、快速。將適當稀釋的菌懸液(或孢子懸液)放入血細胞計數板的載玻片和蓋玻片之間的計數室內，在顯微鏡下進行計數。由於計數室的容積是恒定的(0.1或0.4mm2)，所以可以根據顯微鏡下觀察到的微生物數量換算成單位體積內的微生物總數。因為這種方法是活菌和死菌之和，所以也叫細菌總數計數法。適用於對稀釋後的菌懸液(或孢子懸液)，即液體培養基中的細菌進行計數。
優點:直觀快捷。
血細胞計數板，通常是壹種特殊的載玻片，由四個凹槽組成三個平臺。中間的平臺被壹個很短的橫槽分成兩半，每邊的每個平臺都刻有壹個方形網格，每個方形網格又分成九個大方塊，中間的大方塊就是計數室，在裏面進行微生物的計數。
計票室的規模壹般有兩種規格。壹種是壹個大正方形分成16個中間正方形，每個中間正方形又分成25個小正方形；另壹種是壹個大正方形分成25個中間正方形，每個中間正方形又分成16個小正方形。但是，無論哪種計數板，每個大方塊中的小方塊數量都是壹樣的，即16×25=400個小方塊。
計數中常用抽樣方法。
當每個大正方形的邊長為1或2mm時，每個大正方形的面積為1或4mm2。蓋玻片蓋好後，載玻片與蓋玻片之間的高度為0.1毫米，因此計數室的體積為0.1或0.4毫米3
計數時，壹般是在四個或五個方塊中計數細菌總數，然後取每個方塊的平均值，乘以16或25，再得到壹個大方塊中的細菌總數，再換算成1ml菌液中的細菌總數。
我們以壹個0.1mm3的大正方形和25個中間正方形的計數板為例來計算:設5個中間正方形的細菌總數為A，菌液稀釋倍數為B，則壹個大正方形的細菌總數為1ml = 1 cm3 = 1000 mm3。
同樣，如果是壹塊有16個方格的計數板，五個方格的細菌總數為a’，那麽
第三，設備
釀酒酵母懸液、血細胞計數板、顯微鏡、蓋玻片、無菌毛細管。
四、操作步驟
1.稀釋
適當稀釋釀酒酵母懸浮液。如果菌液不濃縮，就沒必要稀釋。
2.顯微鏡計數室
在添加樣品之前，計數板的計數腔由顯微鏡檢查。如果有汙垢，需要清洗幹凈後再清點。
添加樣品
用蓋玻片覆蓋幹凈幹燥的血細胞計數板，然後用無菌細口滴管從蓋玻片邊緣滴壹小滴(不要太多)稀釋的釀酒酵母液，使菌液沿縫隙通過毛細滲透進入計數室，計數室就充滿了菌液。
顯微鏡計數
靜置5分鐘後，將血細胞計數板放在顯微鏡臺上，先用低倍鏡頭找到計數室的位置，再換成高倍鏡頭進行計數。如果計數前發現菌液過濃或過稀，計數前需要重新調整稀釋度。通常，樣品的稀釋需要每個細胞約5-10個細胞。每個計數室選擇4或5個細胞進行計數。
顯微鏡計數法:①正方形內細胞的計數順序為左上→右上→右下→左下。②壓在網格上的單元格只統計左邊壹行和上面壹行的單元格。③如果酵母細胞粘附，計數團塊中的每個細胞。④如果芽殖酵母的芽體積超過細胞體積的1/2，則認為是獨立個體。⑤總數不少於300個細胞。
5.清潔血細胞計數板
使用後，用水龍頭上的水柱沖洗血細胞計數板，不要用硬物沖洗。洗完之後，自己擦幹或者用吹風機吹幹。顯微鏡下，觀察每個細胞內是否有殘留的細菌或其他沈澱物。如果不幹凈，壹定要反復洗，直到洗幹凈為止。