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問:細菌DNA的提取

壹、水煮模板法——主要用於PCR反應。

操作最簡單,對試劑條件要求低。缺點是純度不夠高,可能含有RNA、蛋白質等雜質。然而,用於壹般檢測目的的PCR反應模板就足夠了。

二、CTAB/NaCl法

CTAB/NaCl法提取的DNA純度高,蛋白質雜質少,保存時間長。編輯更傾向於在第五步孵育中加入終濃度為20μ g/ml的RnaseA,這樣最後就沒有RNASEA汙染了。每壹步都經過精心操作,獲得的DNA可以用於Southern印跡。

註意:DNA可以在-20℃長期保存,但要盡量減少反復凍融,否則會影響DNA的質量。

第三,鹽析法

在第壹種方法和第二種方法之間,CTAB提取糖有效,但也有毒,所以這種方法放棄了CTAB。

實驗註意:提取基因組時最好把槍頭切掉(切掉後在酒精燈上快速通過,使其斷口平滑)。為了避免槍頭對基因組的損傷,最好在引流的時候風幹。

擴展數據:

DNA提取方法

1.酚提取法:先用卵酶K和SDS破碎細胞,消化蛋白質,再用酚和酚氯提取,高速離心後取上清液,得到的DNA大小為100-150kb。

2.甲酰胺解聚法:如上破碎細胞,然後用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合體,再透析獲得DNA,可獲得200 KB左右的DNA。

3.玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,裂解液塗於乙醇上,然後用鉤狀或U形玻璃棒在界面處輕輕攪拌,DNA沈澱溶液纏繞在玻璃棒上。產生的DNA約為80kb。

四。異丙醇沈澱法:基本與1法相同,只需用兩倍體積的異丙醇代替乙醇即可去除小分子RNA(溶於異丙醇)。

5.表面活性劑的快速制備方法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然後用蛋白酶K或苯酚去除蛋白質,用乙醇沈澱或透析。

6.加熱法快速制備:96℃-100℃加熱五分鐘,然後離心,取上清液,可用於PCR反應。

7.堿變性快速制備:先用NaOH 20分鐘,再加入HCI中和,離心後取上清液,含少量DNA。

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