包括Sanger測序,STR親子鑒定、法醫鑒定,SnaPshot測序技術,實時熒光定量PCR。\x0d\\x0d\ 上個世紀末90年代,與“曼哈頓原子彈計劃”和“阿波羅登月計劃”具有同樣劃時代意義的“人類基因組計劃”啟動,這是人類第壹次在分子水平上全面地認識自我。隨著人類基因組計劃的開展,人們對基因與疾病的關系認識更加深入,有機會通過對基因缺陷的檢測分析來判斷各種疾病發生的風險,並由此衍生出壹種新的健康服務項目—基因測序。\x0d\ Sanger測序經過38年的發展已相當完善,成本也降低了10倍以上,現在國際上仍然是基因測序行業的金標準和主力軍。sanger測序是目前所有基因測序的國際金標準,是包括熒光定量PCRTaqman探針法、普通PCR法、芯片法、二代測序法、質譜法等方法的金標準。\x0d\ 2010年以來,出現了很多新壹代測序儀產品,新壹代測序成本低、數據大、速度快,但都有待成熟,準確度不夠高。\x0d\ (壹)、Sanger測序\x0d\ 被檢測的DNA堿基順序依次讀出800bp以上,是壹代所有測序和新壹代所有測序的金標準。代表儀器美國ABI3730XL,Sanger測序壹般醫院很少開展,開展的都發公司做。耗時長達 13年之久的人類基因組計劃也是依靠Sanger測序法才得以最終完成的。Sanger 測序是針對已知致病基因的突變位點設計引物,進行PCR 擴增直接測序。單個突變點的擴增(包括該位點在內的外顯子部分片段的擴增),不必將該點所在基因的全部外顯子都擴增。所以單基因或部分基因控制的疾病樣本檢測,Sanger 測序可以發揮精準和成本低的優勢。\x0d\ (二)、STR親子鑒定、法醫鑒定\x0d\ 通過測定DNA片段的長度和顏色,來確定遺傳關系。是sanger測序技術基礎上,發展起來的壹個技術,所用儀器與sanger測序所用儀器壹樣,檢測原理壹樣,壹臺設備裝兩套檢測軟件,壹臺儀器具有三個功能。代表儀器美國ABI 3130、3130XL、3730儀器,壹般司法機構和sanger測序公司擁有該儀器,醫院沒有。\x0d\ 親子鑒定就是通過對DNA遺傳片段檢測,判定父母與子女之間的親緣關系。\x0d\ (三)、SnaPshot測序技術\x0d\ SNaPshot技術是美國應用生物公司(ABI)開發,是熒光標記單堿基延伸的分型技術,也稱小測序,主要針對中等通量的SNP突變分型項目檢測。通常用於10~30個SNP突變位點分析。是sanger測序技術基礎上,發展起來的壹個技術,和sanger測序儀器壹樣,檢測原理壹樣,壹臺設備裝有兩套檢測軟件,壹臺儀器具有三個功能。代表儀器美國ABI3130、3130XL、3730儀器,壹般sanger測序公司擁該有儀器。\x0d\ 優勢:1、分型準確,2、通量高,3、檢測速度快,4、不受SNP位點多態性特性限制,5、不受樣本個數限制。SNaPshot技術是新壹代測序技術(包括二代測序和芯片測序)SNP突變檢測的金標準,sanger測序技術又是SNaPshot技術突變檢測的金標準。\x0d\ (四)、實時熒光定量PCR\x0d\ 利用熒光信號積累實時監測整個PCR過程,最後通過標準曲線(或者與內參對照)對未知模板進行定量分析。代表儀器美國ABI 7500熒光定量PCR儀等,壹般三甲醫院都有該類儀器,普及較好。使用方便維護簡單。1、突變尋找:定量PCR TaqMan探針雜交。2、基因定量:相對熒光定量PCR,醫學上用來檢測細菌或病毒RNA的表達量。熒光定量PCR是1996 年由美國ABI 公司推出的壹種新定量實驗技術。\x0d\ 實時熒光定量PCR應用領域:臨床疾病診斷:各型肝炎、艾滋病、禽流感、結核、性病等傳染病診斷和療效評價,地中海貧血、血友病、性別發育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優生優育檢測,腫瘤標誌物及瘤基因測序,遺傳基因測序。
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