當前位置:吉日网官网 - 傳統文化 - 如何提取DNA粗提和精提的方法

如何提取DNA粗提和精提的方法

壹、DNA提取(粗提取)

1、酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎細胞,消化蛋白,然後用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb

2、甲酰胺解聚法:破碎細胞同上,然後用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合,再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。

3、玻璃棒纏繞法:用鹽酸胍裂解細胞,將裂解物鋪於乙醇上,然後用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪,DNA沈澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。

4、異丙醇沈澱法:基本同1法,僅用二倍容積異丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在異丙醇中可溶狀態)

5、表面活性劑快速制備法:用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞,然後用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沈澱或透析。

6、加熱法快速制備:加熱96℃-100℃,五分鐘,然後離心後取上清,可用於PCR反應。

7、堿變性快速制備:先用NaOH作用20分鐘,再加HCI中和,離心後取上清,含少量DNA。

二、DNA的濃縮(精提取)

1、固體聚乙二醇(PEG)濃縮:用透析袋外敷PEG至合適量。

2、丁醇抽提濃縮:DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇,但DNA不會。因此重復幾次可顯著減少DNA體積。

3、乙醇或異丙醇沈澱:(1)需要陽離子鹽的存在,NaAc最常用,NaCl對含SDS樣品好,NH4Ac去除dNTP好。PiCl沈澱RNA好,但不能用於反轉錄前。(2)沈澱溫度與時間;0℃壹4℃,12000g,10分鐘,小於100bp DNA需超速離心。

4、精胺沈澱法:與DNA結合後使DNA結構凝縮沈澱,需在無鹽或低鹽溶液。

  • 上一篇:時代的決定性危機是什麽?
  • 下一篇:請問網絡作家和傳統作家哪個收入高
  • copyright 2024吉日网官网