材料和用具 標本夾、吸水紙、塑料袋、紙袋、標簽、鉛筆、記號筆、小刀、枝剪、手鋸、標本缸、酵酸銅、硫酸銅、95%乙醇、甲醛溶液、亞硫酸、甘油、蒸餾水等。
內容與方法
(壹) 病害標本的采集
1 標本采集基本要求
采集完整的標本,最好是先攝影然後再壓制或浸漬保存,拍照越清晰越好,要求拍正常植株和病害部位。每號標本,樣本數量應至少采集2-3份。
2 取樣部位
(1)標本上有子實體的應盡量在老葉上采集
因為它比較成熟,許多真菌有性階段的子實體都在枯死的枝葉上出現,而無性階段子實體大多在活體上可以找到。
(2)柔軟多汁的子實體或果實材料,則應采集新發病的幼果。
(3)病毒病應盡量采集頂梢與新葉。
(4)線蟲病害標本應采病變組織,為害根部的線蟲病害標本除采集病根外還應采集根圍土壤。
(5)表現蔫萎的植株要連根挖出,有時還要連同根際的土壤等壹同采集。
(6)對於粗大的樹枝和植株,則宜削取壹片或割取壹截。
(7)如果病害在葉、果實和枝幹上都有表現時,盡量采集全面。
(8)寄生類應和寄主壹起采集。病害癥狀很特殊病害,要連同植株的枝葉或花壹起采集,以便鑒、定其寄主名稱。
3 標本數據記錄和標本編號
要求記錄準確、簡要、完整。完整的記錄與標簽同樣十分重要,要有寄主名稱、
采集日期與地點、采集者姓名、生態條件和土壤條件等。
4 標本采集 方法
(1)枝幹類、根部病害標本的采集
取其得病部位,用鋸、枝剪或高枝剪采取,切勿用手折斷,影響標本的美觀,對纖維長而強韌的枝幹等,尤應註意。
(2) 葉部病害標本的采集
大型葉植物,它們的葉子和花序均很大,采集標本時可采壹部分或分段采集,以同株上幼小葉加上花果組成壹份標本(同時標明葉實際大小);或把葉、葉柄各自分段取其壹部分;
對於像菟絲子、列當這樣的寄生植物應連同寄主壹起采集,並記錄寄主的名稱。 (3)肉質或多汁植物(花、果實)病害標本的采集
應將其縱切或橫切,有時需將其內部的組織挖出,還要考慮是否將壹半的材料浸泡在保存液中保存。在野外幹燥時,要在切開的莖表面灑大量食鹽,用鹽包裹的材料應置於夾有多層報紙的標本夾中,24小時後要把浸有鹽水的報紙移去,或者用開水將材料燙死,然後放置在薄紙板-鋁板的三明治層中烘幹。
(二)病害標本的制作
從田間采回的標本,除壹部分用作分離鑒定外,對於典型的病害癥狀最好是先攝影然後再壓制或浸漬保存。壓制或浸漬的標本盡可能保持其原有性狀,微小的標本可以制成玻片,如雙層玻片、凹穴玻片或用其它小玻管小袋收藏。
(三) 病害標本的保存
1 幹燥法 適用於壹般含水較少的莖、葉等病害標本的制作,最簡單、最經濟、應用最廣。 將采集的標本夾在吸水紙中,同時放入寫有采集地點、日期和寄主名稱的標簽,再用標本夾壓緊後日曬或加溫烘烤,使其幹燥,幹燥愈快愈能保持原有的色澤,標本質量亦愈高。夏季采的標本在溫濕度高的情況下,容易發黴變色,換紙宜勤,通常在壓制的最初三、四天每天換紙l-2次(視標本含水多少,及溫濕度情況而定),以後每二、三天換壹次,至完全幹燥為止。在第壹次換紙的同時,應將標本加以整理,因經初步幹燥,標本變軟易於鋪展。煙草、蠶豆、梨、馬鈴薯的莖葉等很易發黑變色,都是很難保存顏色的標本,在制作過程中特別要註意快速幹燥。需要保持綠色的幹制標本,可先將標本在2-4%硫酸銅溶液中浸24小時,或經過醋酸銅溶液(配方及方法見浸漬法中醋酸銅的浸漬法)處理後再壓制。也可以在葉面抹壹層液體石蠟後再壓,可以保持鮮綠色2-3天。
2 浸漬法 適用於 多汁的病害標本,
如果實、塊根或擔子菌的子實體等,必須用浸漬法保存。浸漬液體種類很多,有純屬防腐性的,亦兼有保持標本原色的,現介紹數種常用及效果較好的方法。
(1)防腐浸漬法:此類浸漬法僅能防腐而沒有保色作用,如蘿蔔、甘薯等,不要求保色的標本,洗凈後直接浸於以下溶液中。 ①5%福爾馬林浸漬液。
②亞硫酸浸漬液:l000ml水中加5%-6%亞硫酸15ml(壹般市售的亞硫酸含量為5— 6%)或用亞硫酸鈉10.5g,濃硫酸8ml,水500ml配成混合液。
(2)保持綠色標本的浸漬液及浸泡法:
①醋酸銅保(綠)色浸漬法:往50%的醋酸中逐漸加入醋酸銅結晶溶解至飽和作為母 液(大約1000ml50%的醋酸中加入l5g醋酸銅即可達飽和),使用時兌水稀釋1-4倍(稀 釋倍數視標本顏色而異,色深者稀釋倍數可小些)。將此液加熱煮沸,投入標本,開始時標本的綠色被漂去,再經數分鐘後標本又恢復綠色,此時立即將標本取出,用清水洗凈,保存於5%的福爾馬林溶液中,此法稱為熱處理。冷處理的辦法是將標本置於上述稀釋液中浸3小時後標本退色,再經72小時後標本恢復綠色,此時將標本取出,取水沖凈,保存於5%的福爾馬林溶液中。此法保持色澤時間較長,其保色原理大致是銅離子與葉綠素中的鎂離子發生置換作用。所以,溶液經多次處理標本後,銅離子會逐漸減少。如要繼續使用,應補入適量的醋酸銅。此法保存標本往往略帶藍色,與植物標本原色稍有出入。
②硫酸銅保(綠)色浸漬法:用清水沖洗標本,直接浸泡在5%的硫酸銅溶液中1—7天,待標本略帶褐色時取出用清水漂洗,去除標本表面多余的硫酸銅溶液,然後保存在亞硫酸浸漬液中。
③保存黃色和桔紅色標本的浸漬液:保存杏、梨、柿、紅辣椒等果實標本用亞硫酸浸
漬液,亞硫酸浸漬液有漂白作用,因此使用時要註意濃度,壹般用1 %即可(浸杏時濃度可再稀些),因濃度太小,防腐力不夠,可加入適量酒精。為了防止果實崩裂,可加入少許甘油。
④保存紅色標本的浸漬液:保存標本紅色較難,因為紅色是水溶性的花青素,很難保存。常用Hesler浸漬液保存,成分是:氯化鋅50g,福爾馬林25ml,甘油25ml,水1000ml。 將氯化鋅溶於熱水中,加入福爾馬林,如有沈澱,用其澄清液。此溶液適用於由於花青素 而顯紅色的標本,如蘋果、番茄等。
(四) 標本的保存
制成的標本,經過整理和登記,然後依壹定的系統排列和保藏。
菌類標本壹般按分類系統排列,要有兩套索引卡片,壹套是寄主索引,壹套是菌類索引,以便於尋拽和整理。
標本室(櫃)要保持幹燥、潸浩,並要定期施藥以防蟲蛀與黴變。
1 標本盒保藏 教學和示範用的幹制病害標本,采用玻面紙盒保藏比較方便,玻面紙盒,的適宜大小為20×28×2 cm。紙盒中先鋪壹層棉花,並在棉花中加少許樟腦粉以驅蟲。最後在棉花上放上標本和標簽。
2 標本瓶保藏 浸漬的標本放在標本瓶內保藏,為了防止標本下沈和上浮,可綁在玻璃條上然後再放入標本瓶。標本瓶的口蓋好後滴加石蠟封口,然後貼上標簽。
3 紙套內保藏 用牛皮紙疊成15×33cm的紙套,大量保存的幹制標本,大多采用紙套保藏,將標本裝入紙套內,並在紙套上貼好標簽,放在標本櫃中即可。