在培養液中加入1 ~ 2ml乙醚，靜置壹會，乙醚層浮在培養液上。此時沿管壁慢慢加入5 ~ 10滴吲哚試劑(加入吲哚試劑後不要搖動試管，以免損傷乙醚層，影響結果觀察)。若有吲哚，乙醚層呈玫瑰紅，為吲哚試驗陽性反應，否則為陰性反應，陽性反應用“+”和“”。