材料和用具:標本夾、吸水紙、塑料袋、紙袋、標簽、鉛筆、記號筆、小刀、剪刀、手鋸、標本罐、乙醇酸銅、硫酸銅、95%乙醇、甲醛溶液、亞硫酸、甘油、蒸餾水等。
內容和方法
(1)疾病標本的收集
1標本采集的基本要求
要采集完整的標本,最好是先拍照,然後按壓或浸泡保存。照片越清晰越好。需要拍攝正常植物和患病部位。對於每個標本,至少應采集2-3個樣本。
2取樣地點
(1)如果標本上有子實體,應盡量采集在老葉上。
因為是成熟的,很多真菌有性階段的子實體出現在枯枝落葉上,而無性階段的子實體可以在活體中找到。
(2)對於柔軟多汁的子實體或果料,應采集新發病的幼果。
(3)病毒病應盡量采集頂部和新葉。
(4)線蟲病標本應采集患病組織,危害根系的線蟲病標本應采集除根系外的根系周圍土壤。
(5)萎蔫的植物要連根挖起,有時要和根際土壤壹起收集。
(6)對於較粗的枝條和植物,宜剪壹截或切壹截。
(7)如果病害表現在葉、果、枝上,盡量綜合收集。
(8)寄生蟲應與宿主壹起收集。有特殊癥狀的病害應與植物的枝、葉或花壹起收集,以便鑒別和確定其寄主名稱。
3標本數據記錄和標本編號
記錄應準確、簡明、完整。完整的記錄和標簽同樣重要,主機名、
采集日期和地點、采集者姓名、生態條件和土壤條件等。
4標本采集方法
(1)收集樹枝和樹根的病害標本
用鋸、枝剪或高枝剪取患病部位。不要用手掰,會影響標本的美觀。要特別註意纖維長而結實的枝條。
(2)葉部病害標本的收集
大葉植物,其葉片和花序都很大,采集標本時可部分或分段采集,壹個標本由同壹株植物上的幼葉和花組成(同時註明葉片的實際大小);或者分別取壹部分葉子和葉柄;
菟絲子、豆科等寄生植物應與寄主壹起采集,並記錄寄主名稱。(3)肉質或多汁植物(花和果實)的病害標本的收集
要縱向或橫向切開,有時要挖出內部組織,還要考慮是否將壹半材料浸泡在保存液中保存。田間晾曬時,要在切好的莖稈表面撒上大量的鹽,用鹽包裹的材料要放在有多層報紙的標本夾裏。24小時後,應將浸泡在鹽水中的報紙取出,或將材料用開水燙死,然後放入紙板-鋁夾層中晾幹。
(2)疾病標本的制備
除了壹些從田間采集的樣本用於分離鑒定外,最好先對典型的病害癥狀進行拍照,然後壓制或浸泡保存。壓制或浸漬後的標本盡可能保持原有的性質,微小的標本可制成玻片,如雙層玻片、凹面玻片或收集在其他小玻璃管中。
(3)疾病標本的保存
1幹燥法適用於制作莖、葉等病害的標本,用水量少,最簡單,最經濟,應用最廣泛。采集的標本放在吸水紙中,同時放入寫有采集地點、日期、宿主姓名的標簽。然後用標本夾壓住,在太陽下烘烤或加熱使其幹燥。它們幹燥得越快,它們的原始顏色就越好,它們的質量就越高。夏季采集的標本在高溫高濕條件下容易發黴變色,宜勤換紙。通常在壓紙的前三四天每天換L-2次紙(視標本含水量和溫濕度而定),之後每隔兩三天換壹次紙,直到完全幹透。第壹次換紙的同時,要把標本整理出來,因為標本經過初步幹燥後,變得柔軟,容易鋪開。煙草、蠶豆、梨、土豆的莖葉容易變黑變色,標本不易保色,制作過程中要特別註意快速幹燥。如需保持綠色幹燥標本,可將標本浸泡在2-4%的硫酸銅溶液中24小時,或在壓制前用醋酸銅溶液處理(配方及方法見浸漬法中醋酸銅的浸漬法)。也可以在葉子上塗壹層液體石蠟,然後按壓,保持亮綠色2-3天。
2浸泡法適用於肉質病害標本,
擔子菌的果實、塊莖或子實體必須浸泡保存。浸液有很多種,有些是純防腐的,有些是用來保持標本本來的顏色。本文介紹幾種常用且有效的方法。
(1)防腐浸漬法:這種浸漬法只能防腐不能保色,如蘿蔔、紅薯等。清洗後,不要求保色的標本直接浸入以下溶液中。① 5%福爾馬林浸漬溶液。
②硫酸浸漬溶液:在1000毫升水中加入5%-6%的亞硫酸15毫升(壹般市場上亞硫酸含量為5-6%)或用10.5克亞硫酸鈉、8毫升濃硫酸和500毫升水配成混合溶液。
(2)浸泡溶液和保存綠色標本的方法:
(1)醋酸銅護色浸漬法:將醋酸銅晶體逐漸加入50%醋酸中溶解至飽和作為母液(加入15g醋酸銅可使50%醋酸約1000ml飽和),使用時用水稀釋1-4倍(稀釋倍數視標本顏色而定,顏色深者稀釋倍數可小壹些)。將該溶液加熱煮沸,並放入標本中。首先,標本的綠色被去除,然後標本在幾分鐘後恢復綠色。此時,立即取出標本,用清水沖洗,保存在5%福爾馬林溶液中。這種方法叫做熱處理。冷處理的方法是將標本浸泡在上述稀釋液中3小時,然後標本會褪色,72小時後標本恢復綠色。此時,標本將被取出,用水沖洗並保存在5%的福爾馬林溶液中。這種方法保色時間長,其護色原理大致是葉綠素中的銅離子取代鎂離子。所以溶液經過多次處理後,銅離子會逐漸減少。如果要繼續使用,要加入適量的醋酸銅。用這種方法保存的標本往往略呈藍色,與植物標本的本來顏色略有不同。
(2)硫酸銅保色浸漬法:用清水沖洗標本,直接浸泡在5%硫酸銅溶液中1-7天,待標本呈棕褐色時取出用清水沖洗,除去標本表面多余的硫酸銅溶液,再保存在亞硫酸浸漬液中。
(3)保存黃色和橙色樣品的浸漬液:保存杏、梨、柿子、紅辣椒等水果樣品,用亞硫酸浸泡。
酸洗液和亞硫酸浸漬液有漂白作用,使用時要註意濃度,壹般1%即可(泡杏子時濃度可以更稀)。因為濃度太小,耐腐蝕性不夠,可以加入適量的酒精。為了防止水果開裂,可以加壹點甘油。
(4)保存紅色標本的浸漬液:標本的紅色很難保存,因為紅色是壹種水溶性的花青素,很難保存。通常保存在赫斯勒浸漬液中,其成分為:氯化鋅50g,福爾馬林25ml,甘油25ml,水1000ml。將氯化鋅溶於熱水中,加入福爾馬林,如有沈澱則用其清液。該溶液適用於因花青素而呈紅色的樣品,如蘋果和番茄。
(4)標本的保存
將準備好的標本進行分類登記,然後按照壹定的制度進行整理保存。
真菌標本壹般按照分類系統排列,要有兩套索引卡片,壹套是寄主索引,壹套是真菌索引,方便查找、拖動和整理。
標本室(櫃)應保持幹燥、寬敞,定期施藥,防止蟲蛀、黴變。
1標本盒更便於存放幹燥的疾病標本,用於教學和演示,玻璃紙盒的合適尺寸為20×28×2 cm。先在紙箱裏鋪壹層棉花,棉花裏加壹點樟腦粉驅蟲。最後,在棉花上貼上樣品和標簽。
2標本瓶保存浸漬後的標本保存在標本瓶中。為了防止標本下沈和漂浮,可以將標本綁在玻璃條上,然後放入標本瓶中。標本瓶瓶蓋合上後,加入石蠟密封,然後貼上標簽。
3紙套用牛皮紙疊起來,形成15×33cm的紙套,大量幹燥的標本大多保存在紙套中。將標本放入紙套中,在紙套上貼上標簽,放入標本櫃中。