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心血管系統的雕亡

細胞雕亡與心律失常的關系在心血管臨床上報道較早。James對近30年來他的心臟傳導系統障礙病例進行了形態學總結,指出許多心臟電活動障礙是先天性的,它們都與多發性浦肯野細胞瘤中的細胞雕亡、房室結中的先天性良性心血管系統多囊瘤、某些類型的先天性心臟傳導阻滯、房室結和希氏束的出生後形態發生、Wolff-Parkinson-White綜合征、家族性房顫和QT間期延長綜合征有關。隨後,他提出陣發性心律失常、傳導系統障礙(在某些情況下可導致猝死)和心律失常引起的右心室發育不良與細胞雕亡有關。通過對3例心臟傳導阻滯猝死患者的屍檢,發現竇房結和房室結缺失,心臟傳導系統的心肌細胞數量極度減少,進壹步證實了此類心律失常的發生與心肌細胞雕亡有關。

心血管臨床中細胞雕亡的另壹個方面是它與心臟超負荷和心力衰竭的關系。心臟超負荷早期,心肌細胞出現代償性肥大,如果心臟負荷持續過大,心肌細胞數量減少;心力衰竭的主要表現是收縮功能和射血分數下降,決定性因素是心肌細胞數量減少和心肌組織纖維化。Katz提出,慢性心肌肥大的有害反應包括心肌細胞對生長因子反應的失衡,即壹些能介導肥大反應的生長因子在衰老或持續超負荷的心肌細胞中也能促進雕亡;血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)和硝酸鹽可抑制生長和擴張血管,可通過抑制這些生長因子的產生來改善心力衰竭的預後。Bing的實驗證實,在持續超負荷的心臟中,壹些生理狀態下抑制雕亡的營養因子數量減少,也能誘導心肌細胞雕亡。Teiger等通過DNA凝膠電泳和原位3’末端標記證實,小鼠心臟在壓力負荷過大時引起心肌細胞肥大,心肌細胞數量減少,特別是在壓力超負荷早期(7天內),細胞數量減少主要是由於雕亡,雕亡細胞數量在第4天達到高峰。

動脈粥樣硬化是西方國家的常見病。其主要病理特征是內膜損傷和血管平滑肌細胞增殖。細胞雕亡是否參與其發病機制引起了許多學者的關註。Cho等人指出,新生哺乳動物的血管構築在出生後由於血流、壓力等因素的影響可以發生重塑,血管平滑肌細胞在重塑過程中低水平增殖和雕亡。隨著動物年齡的增加,血管重構減少,平滑肌細胞的增殖和雕亡率也降低。Bennett等發現,大鼠血管平滑肌細胞的雕亡,如果是c-myc誘導的,則是P53基因促進的,而bcl-2不促進,去除生長因子後的血管內皮細胞雕亡與P53無關。Kockx等從47例再次行冠狀動脈旁路移植術的患者中取出80個大隱靜脈移植物碎片,發現65個移植物碎片的狹窄和閉塞是由於平滑肌層增厚,平滑肌細胞雕亡後纖維化所致。Bennett等人進壹步觀察了動脈粥樣硬化的冠狀動脈、正常冠狀動脈和主動脈,發現動脈粥樣硬化和正常冠狀動脈的平滑肌細胞均發生雕亡,但正常動脈的平滑肌細胞只有在去除血清生長因子後才發生雕亡,而動脈粥樣硬化斑塊中的平滑肌細胞在有血清存在時可發生雕亡,去除血清後雕亡率明顯增加, 因此推測血管壁上動脈粥樣硬化斑塊的脫落和崩解是由平滑肌細胞的異常雕亡引起的。 Isner等對56例冠狀動脈粥樣硬化患者進行PTCA和PTCA後再狹窄的觀察,發現35例樣本中存在血管平滑肌細胞雕亡,特別是在再狹窄的病例中,雕亡率明顯高於原發病例,提示PTCA後再狹窄的發生很可能與平滑肌細胞增殖和雕亡紊亂及過度纖維化有關。韓等檢測了35例冠狀動脈粥樣硬化患者,發現其中25例存在細胞雕亡,進壹步證實了動脈粥樣硬化的發生與細胞雕亡有關。

越來越多的缺血性心臟病引起了人們的關註,壹些學者對缺血狀態下心肌細胞是否發生雕亡進行了探討。Tanaka等人將分離的新生大鼠心肌細胞置於厭氧培養環境中,發現它們在12小時後雕亡,而對照組的非心肌細胞(成纖維細胞)在72小時後沒有雕亡,而是增殖。Itoh等觀察了19例急性心肌梗死死亡患者的心肌細胞,發現這些患者的心肌細胞除壞死外,還有雕亡。Kajstura等人通過阻斷大鼠冠狀動脈觀察到,在心肌缺血早期,心肌細胞雕亡明顯多於壞死。

減輕組織器官缺血性損傷最有效的方法是盡快恢復其再灌註,但長時間缺血後的再灌註可能導致更嚴重的損傷,即所謂的再灌註損傷。Gottlieb等發現缺血30分鐘、270分鐘和缺血5分鐘再灌註240分鐘後心肌細胞不雕亡,而缺血30分鐘再灌註240分鐘後心肌細胞雕亡,提示雕亡可能是心肌對再灌註損傷的特殊反應,可能與延遲性心肌細胞死亡(如臨床上心肌頓抑的發生)有關。心血管系統藥理實驗的選擇與應用

血壓測量

插管直接測血壓:動物急性血壓試驗常用於分析藥物對循環系統的影響。常用的動物有狗、貓、兔、鼠。雖然已經報道了猴子、綿羊、豚鼠、小鼠、雞、鳥和青蛙的血壓值和急性測壓法,但它們很少用於藥物對血液循環影響的常規研究。

大鼠血壓除個別藥物(如毒扁豆堿)異常外,對大多數升壓和降壓物質的反應與人或大型動物(如狗、貓)壹致,非常敏感。目前常用於檢測體液或組織中去甲腎上腺素等升壓物質含量的動物之壹。鼠源容易解決,比較經濟,用量少,占用工作面小。缺點是動物小,操作困難,血管小,容易凝血,要提前註射肝素抗凝。用狗做實驗有很多好處,比如血壓恒定,比老鼠、兔子等小動物更接近人體,對藥物敏感,與人類基本壹致;血管和神經較粗,管壁有彈性,便於外科手術操作,適用於分析藥物對循環系統的作用機理;心跳有力,能描繪出良好的血壓曲線;用於藥物篩選時,可重復使用。缺點是來源困難,人體昂貴,不適合需要大量動物的實驗。貓在血壓測試中與狗有相同的優缺點,特別值得指出的是,它們更適合分析藥物作用於循環系統的機制,因為貓不僅有瞬膜,便於分析藥物對交感神經節和神經節後部分的作用,而且易於制備脊髓貓,以排除脊髓以上中樞神經系統對血壓的影響。另外,貓比狗輕(實驗中可選用體重1.8 ~ 2.5 kg的貓),用量較少。兔子容易來,性情溫和,所以血壓測試也是常用的。但並不理想,因為兔子是草食動物,個體間血壓差異很大,對藥物的反應不像上述動物那樣恒定和敏感,而且脆弱,特別是長毛大耳的兔子容易死亡,所以不適合做血壓測試,血管小,心跳弱,插管容易出現血栓。此外,約20 ~ 30%的家兔有從頸動脈到甲狀腺的小動脈分支。在這種情況下,宜采用反向結紮的方法切斷這壹分支,否則在其上方插入動脈插管後,當壓力計加壓或打開動脈夾時,大量檸檬酸鈉可通過這壹側技術,導致家兔深吸氣,血壓劇烈波動,檸檬酸鈉會灌入心臟而死亡。

非插管(間接)測壓法:非插管測壓法最常用的動物是狗、大鼠和兔。大鼠尾部容積測壓法、大鼠尾部脈動影響測壓法和大鼠足部測壓法經常在沒有插管的情況下使用。犬無插管測壓采用頸動脈皮橋法、脛動脈間接測壓法和股動脈穿刺測壓法。頸動脈皮橋測壓法和兔耳測壓法常用於無插管的家兔。

實驗性高血壓

在1934中,Goldblatt證實了狗的腎動脈狹窄可產生持續性高血壓,這壹實驗研究引起了廣泛關註。隨後,世界各地都開展了高血壓的動物實驗,建立了不同的高血壓動物模型,提出了各種高血壓病因學說。犬、貓、大鼠、兔、猴是常用的急性實驗性高血壓模型。引起急性實驗性高血壓的方法很多,如直接刺激中樞神經系統,通過神經反射,註射外源性兒茶酚胺或其他體液加壓物質。實驗通常在麻醉的動物身上進行。

直接刺激中樞神經系統,利用埋藏式電極或在直立起搏器的幫助下,刺激大鼠或猴的外側下丘腦防禦警戒區,可明顯提高動物的血壓、心率和心輸出量。神經反射性高血壓可以在狗身上進行。用波長為0.65438±0 ms、頻率為每秒5-50次的方波刺激狗的隱神經、喉上神經或頦迷走神經的中樞端,持續65438±05秒,可使狗的收縮壓和舒張壓升高20-65438±000 mmHg。在腎源性升壓劑的註射方法中,選擇大鼠、兔或狗。實驗前切除動物的雙腎,術後幾小時或24小時,靜脈註射或滴註腎提取物、腎素或合成血管緊張素可明顯升高血壓。動物腎臟摘除後幾小時,血液中的血管緊張素原開始升高。24小時後可達峰值,可使大鼠血液中血管緊張素原始值增加14 ~ 15倍,犬增加3倍左右。從而大大提高動物對外源性腎壓迫物質的敏感性。當狗、貓或兔靜脈註射腎上腺素或去甲腎上腺素,劑量為2 ~ 8微克/公斤時,血壓可明顯而短暫地升高。給大鼠靜脈註射0.5 ~ 3微克腎上腺素或去甲腎上腺素,也可導致血壓升高,類似於對大腦的作用。如果想長期保持血壓上升,可以靜脈滴註上述藥物。給狗或貓靜脈註射0.1 ~ 0.6 μ的加壓素或給大鼠靜脈註射0.006 ~ 0.008 U的加壓素,可導致受試動物血壓明顯升高,但重復註射易產生耐受。在急性高血壓合並子宮胎盤缺血的方法中,選用孕兔通過胎盤作Z形縫合,造成子宮胎盤缺血,術後血壓逐漸升高,在1/2 ~ 2小時達到高峰。但要註意縫線不要穿過子宮壁,否則不會出現高血壓。

慢性實驗性高血壓的類型:遺傳性高血壓、兔和大鼠的遺傳性高血壓均屬於多基因遺傳。選擇收縮壓高於1.60 mmHg的家兔進行近親繁殖,半數幼兔可發生高血壓。目前,遺傳性高血壓的大鼠有很多種,如岡本鼠假笑、新西蘭鼠GHR、米蘭鼠MHS和布魯克海文鼠HSR。此外,岡本還培育了壹些亞種。遺傳性高血壓大鼠壽命明顯縮短。

可選用神經原性高血壓、狗、大鼠和兔,通過作用於動物神經系統的功能性或物理性方法誘導條件反射性高血壓和皮質性高血壓模型。用出生後的小鼠誘導離體高血壓。如果將大鼠隔離,高血壓的發生率和血壓升高的過程不如小鼠顯著。大鼠長期暴露於噪聲或鑰匙叮當聲引起的聽源性應激,可誘發神經源性高血壓,與人類高血壓相似,適用於抗高血壓藥物的篩選。大鼠正常平均收縮壓的標準差為113±8 mmHg,在噪聲刺激三個月後上升到130 ~ 140 mmHg,40%動物的收縮壓高達160mmHg。家鼠與家鼠雜交出生的大鼠比純種大鼠更易發生聽源性高血壓。褐家鼠適宜年齡為120日齡。向狗或兔的小腦延髓池內註射白陶土生理鹽水混懸液,可使動物顱內壓增高,然後血壓會逐漸升高。血壓峰值可超過原始值50 ~ 80 mmHg,並可保持數月不變,但這種方法誘發高血壓的百分比不超過壹半。為了抑制高血壓,常選擇家兔切斷其主動脈的減壓神經,或選擇狗切斷頸動脈竇區的神經。用狗做實驗的時候,最好選擇臉寬的狗,因為這樣的狗更容易找到頸動脈竇。

腎性高血壓常選用狗、兔、大鼠。縮小壹側腎動脈,使腎動脈血流量減少50%以上或同時縮小兩側腎動脈,均可導致血壓長期升高。兔腎動脈分支以上腹主動脈狹窄,或腎小動脈及其分支多次栓塞均可形成高血壓。用玻璃紙或橡膠膜包裹腎臟,將火棉膠註入腎臟周圍的空間,或用乳膠膜條或圖8中的絲線在腎門周圍結紮,可使狗、兔或大鼠的血壓永久性升高。

內分泌高血壓,1942 Selye首次證明脫氧皮質酮(DOC)可引起雞的高血壓,氯化鈉飼料可加重高血壓。哺乳動物如大鼠單獨使用大劑量DOC不易引起高血壓,往往需要切除壹個腎,提前加入1%氯化鈉飼料才能引起持續性高血壓。雌性大鼠比雄性大鼠更容易誘發高血壓。大鼠適宜體重為100 ~ 150g。狗和大鼠註射垂體前葉提取物或家兔靜脈註射0.5 ~ 0.7毫克後葉加壓素,數周後可引起血壓升高。

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