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RNA提取原理

RNA提取的原理是用Trizol溶液提取,使總RNA與DNA和蛋白質分離。Trizol是壹種酸性溶液,含有硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿。GITC不可逆地使蛋白質和核糖核酸酶變性。其次是離心。在酸性條件下,總RNA保留在上層水相,而大部分DNA和蛋白質保留在中間相或下層有機相中。然後通過用異丙醇沈澱回收總RNA。加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)可以使核糖核酸酶失活。

提取rna時,加入氯仿,分為三層:水相(含有RNA,可能還有壹點DNA),中間白色薄層(應該是蛋白質和DNA)和下層有機相(氯仿和蛋白質等)。).

氯仿是壹種分子量相對較大的有機溶劑。提取RNA時,氯仿可以快速有效地將有機相與無機相分離。DNA提取過程中,苯酚和蛋白質主要在有機相中結合,使蛋白質和DNA分離,DNA進入水相。但在提取RNA的過程中,需要避免蛋白質和DNA的分離,否則DNA會釋放到水相中。無論有無苯酚,氯仿本身對蛋白質有變性作用,容易使DNA的親水基團與水相接觸產生劇烈震蕩。所以不要劇烈搖晃。

異丙醇的作用是通過-OH的疏水作用保護RNA或DNA鏈中的親水基團,相當於沈澱,但這個反應發生在水相中,與氯仿並不矛盾。

細胞中有很多種不同功能的小RNA,如組成剪接體的SNRNAs,負責rRNA形成的snRNA,參與RNAi的miRNA和siRNA,可以調節基因表達。其他如I型和II型內含子、RNaseP、HDV、核糖體RNA等。,具有催化生化反應的活性,即具有酶的活性,稱為核酶。

RNA在各種生物活動中起著至關重要的作用。脫氧核糖沒有2'-OH。RNA的2'-OH中的O(氧原子)在羥基(水)和氫結合時,可以在3 '碳原子以下的磷酸基團附近形成含有5個價鍵的P(5 P-O)。

RNA和DNA是核酸,加上脂類、蛋白質和碳水化合物。核糖的2位碳與羥基相連是RNA的壹個重要結構特征。這種羥基使得RNA雙鏈的結構最接近A型構象。但在壹些單鏈的二核苷酸環境中,極不可能形成DNA最常見的B型螺旋構象。

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