腫瘤細胞耐藥性的產生是壹個復雜的過程，其機制涉及藥物代謝、病理、生理等多學科，這就決定了腫瘤細胞耐藥性的機制是復雜的。因此，體外研究腫瘤細胞的耐藥機制仍然是壹種重要的方法。
壹種藥物長期作用於某壹類細胞，殺死不耐藥的細胞，而對這類細胞耐藥的細胞不能被殺死，也就是進行了選擇。大量耐藥細胞繁殖產生許多耐藥後代，但再次使用這種藥物時藥效大大降低的現象，就是細胞的耐藥性。采用體外低濃度梯度遞增結合大劑量間歇沖擊的方法，誘導腫瘤細胞對特定藥物產生耐藥性，從而構建對特定藥物具有耐藥性的腫瘤細胞系。
長期接觸低劑量藥物引起細胞的藥物化學過程發生變化，細胞膜上出現Pgp糖蛋白，使細胞對藥物逐漸耐受。隨著藥物濃度的增加，它們的耐受程度逐漸加強。
壹種耐藥細胞株的構建方法
A.？親代細胞系IC50的檢測
IC50(半最大抑制濃度)，即半抑制濃度，是指壹種物質對某些生物程序抑制50%時的濃度。在細胞增殖方面，可以理解為對細胞增殖的抑制作用達到正常細胞增殖水平的50%時的藥物濃度。IC50通常用於測量藥物對細胞的毒性或細胞對藥物的耐受性。在藥物實驗中，IC50常用於評價實驗中所用藥物的濃度。IC50的計算方法有很多，如Excel、graphpad prism、SPSS等。
B.？藥物濃度增加法/大劑量藥物休克法
1)大劑量藥物休克法:將對數生長期的腫瘤細胞(匯合度60%-80%)置於含藥物濃度的培養液中，棄去培養液，用PBS洗滌兩次，更換無藥物培養基，進行常規培養，待細胞恢復生長培養壹段時間後，重復上述操作。將篩選出的細胞在壹定濃度的藥物濃度培養液中繼續培養，通過這種方式改變作用時間。* * *經過1h，2h，4h，6h，12h，24h，36h，48h，60h，72h***10個動作時間段，最後，6-8個月。
大劑量藥物休克法的優點是接近大劑量化療藥物休克的臨床治療，缺點是大劑量藥物休克法的藥物濃度很高，細胞培養可能因外界環境突變而難以耐受，細胞狀態難以控制，耐藥性不穩定。
2)增加藥物濃度法:取對數生長期的腫瘤細胞(匯合度為60%-80%)，加入低初始濃度的藥物(建議母細胞株IC50為1/10-1/5)24h，棄去培養基，用PBS洗兩次，不加藥物更換。細胞在此濃度下穩定生長後，增加藥物濃度繼續培養，依次增加藥物濃度。藥物誘導持續6-8個月，直到細胞能在藥物濃度下穩定生長。
增加藥物濃度法的優點是誘導耐藥細胞的藥物劑量是漸進的，細胞培養的外部環境是逐漸變化的，細胞的耐受性更強，狀態良好，但缺點是誘導耐藥的過程需要較長的時間，化療藥物的作用方式不同於化療藥物大劑量、短療程的臨床化療原則。
C.？耐藥細胞系IC50的檢測
檢測耐藥細胞系的IC50，根據IC50值計算耐藥性index，RI)，其中RI=耐藥細胞系的IC50/親代細胞系的IC50，RI >；5.認為耐藥細胞系的耐藥性符合耐藥菌株的要求。