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抗體的制備有哪些?

(1)多克隆抗體的制備。

①免疫方法:對於多克隆抗體,免疫方法壹般包括皮下或肌內免疫、皮內免疫、淋巴結免疫和混合免疫。壹般來說,皮下或肌肉免疫產生的抗體很多;皮內免疫需要的抗原較少,在抗原珍貴的情況下尤其適用,但相比之下產生的抗體較少。混合免疫法的優點是抗原用量少,抗體產生快。

②多克隆抗體的制備:免疫動物(常用動物有兔、羊、狗等。)與抗原,分離抗血清,純化抗體。多克隆抗體的同質性差,特異性相對較低。因此,多克隆抗體在農藥殘留快速檢測技術中的應用受到了壹定的限制。但近年來,也有學者剛剛利用多抗體交叉反應高的特點,通過制備某壹類(或幾類)農藥“* * * *結構”的半抗原或制備含有多個抗原決定簇的人工抗原制備“廣譜特異性”抗體,進行農藥多殘留分析的研究。

(2)單克隆抗體的制備。單克隆抗體的制備技術最初是由錢德勒和米爾斯坦(1975)利用B淋巴細胞雜交瘤技術發現的。目前,該技術已廣泛應用於疾病診斷、生物和醫學研究、環境和食品安全檢測(監測)等領域。單克隆抗體同質性高,只與抗原的某個決定簇結合,特異性較高。而且產生抗體的單克隆細胞可以在體外繁殖,抗體的產生不受動物免疫時間的限制。只要管理和培養技術正確,抗體是可以無限量產生的。基本過程是動物免疫、細胞融合、克隆篩選、單克隆抗體的表征、腹水誘導、收集和純化。

(3)重組抗體的制備。近年來,隨著蛋白質技術和DNA重組技術的發展,人們通過研究抗體產生的遺傳本質、重組抗體的篩選技術和直接定位誘導的基因操作技術,獲得了具有多種特異性和親和力的人工重組抗體,能夠耐受壹定的溫度、pH和有機溶劑。壹般用抗原免疫小鼠,經過壹定時間後,在無菌條件下取出小鼠脾臟,提取脾細胞總RNA。以RNA逆轉錄合成的cDNA為模板,通過PCR擴增抗體,將抗體中的輕鏈和重鏈連接成ScFv(單鏈可變片段)。將PCR擴增的ScFv片段用酶消化,與噬菌體載體連接,然後用常規方法轉化到大腸桿菌或其他生物中。用噬菌體抗體人工培養大腸桿菌,獲得重組抗體。這種方法可以快速產生抗體,通過誘變可以改變抗體的特性,使抗體的特異性更強。而且通過該技術獲得的噬菌體抗體庫可以同時識別多種農藥,可用於農藥多殘留免疫分析技術的研究。

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