但需要指出的是,有些專性寄生真菌,如白粉病、銹菌、病毒和擬桿菌原蟲,目前還不能在人工培養基中分離培養,因此不能用壹般的分離培養方法對其進行檢驗。由於檢驗的目的不同,方法也不同,常用以下五種方法:(1)要隔離潛伏在種子表面或深層的病菌,可先將種子表面消毒,用無菌水洗凈,整粒或破碎後置於培養基上。
(2)如果要確定病原體的潛伏位置,可將種子表面消毒,用無菌水沖洗,將種子放入已滅菌的培養皿中,用已滅菌的手術刀分成不同部分,移植到培養基上,或先將種子按不同部分分成小塊再消毒表面進行培養。
(3)主要了解種子外部附著的菌群時,應先用無菌水沖洗,然後將洗滌液稀釋到壹定程度,再采用稀釋法進行培養。
(4)將種子用無菌水洗凈後,直接放在培養基上培養,觀察病原菌種類及其菌落,同時觀察種子的發芽率和感病性。
(5)分離塊莖、塊根、幼苗、接穗等繁殖材料攜帶的病菌時,可先用酒精或氯化汞溶液對患病部位進行表面消毒,清洗後再選取內部組織進行培養,或切取與健康組織相鄰的部分患病部位進行表面消毒清洗,再進行培養。
不同的病原菌使用不同的培養基、分離方法和培養條件,因其材質不同,必須在不同的地方使用。對於還沒有成熟分離方法的細菌,需要反復研究找到最適合的培養基、合適的分離方法和培養條件。通過分離和培養獲得的病原體應通過必要的步驟進行鑒定。某些具有典型特征的病原菌,可通過顯微鏡檢查其形態特征來確定;有些病原菌需要結合其培養特征、生理生化反應進行鑒定(如各種植物病原菌的鑒定);有些疾病需要按照“羅伯特·科赫定律”的程序進行接種和鑒定。