1.兒茶酚胺誘導的心肌壞死模型
兒茶酚胺通過收縮冠狀動脈,增強心肌收縮力,增加心肌耗氧量,誘發心肌壞死。
常用大鼠體重100~200g,男女不限。
帶有針電極的心電圖儀或示波器,或生理記錄儀。
兒茶酚胺:常用異丙腎上腺素水溶液,也可用去甲腎上腺素。
需要及時記錄心電圖時,可預先用乙醚將大鼠輕度麻醉,仰臥位固定頭部和四肢,用胸導聯和ⅱ導聯記錄心電圖。也可以先註射藥物,然後定期觀察心電圖變化。
大鼠大腿內側皮下(或腹腔)註射異丙腎上腺素水溶液,每日1次,劑量為1~10mg/kg體重,連續2天。心電圖可以記錄在1,5,10,30,45...每次註射後min觀察急性心肌缺血的變化。
壹般在首次註射後3 ~ 4天形成界限清楚的心肌壞死竈,第7天竈內成纖維細胞明顯增多,3 ~ 4周後進入心肌纖維化階段。
最後壹次註射後48小時進行心臟病理檢查,大部分動物可見邊界清晰的心肌壞死竈。壞死後,這些病變中的壹些是幹凈和空的,幾乎沒有細胞;更多的是多細胞病變,具有強烈的巨噬細胞反應和旺盛的成纖維細胞增殖。壞死竈主要分布在左心室壁和室間隔,尤其是心尖附近。通常較大的病變多分布在乳頭肌和內層心肌,而中層和外層心肌的病變壹般較小。可以看到,在心壁內層的病變中,心內膜下常滯留1~2壞死的心肌細胞,但這種滯留不像典型的心肌梗死那樣完全,部分壞死可達心內膜。心肌壞死常分布在冠狀動脈的小分支周圍。
心肌壞死或纖維化的範圍可通過圖像分析系統測量,心肌纖維化也可通過膠原含量檢測。
兒茶酚胺誘導心肌壞死模型簡單可靠。兒茶酚胺具有收縮冠狀動脈、增強心肌收縮力等多種功能,在心肌壞死的病理特征和機制上與人類缺血缺氧性心肌死亡有壹定的相似性。這種模型可用於心肌壞死和心肌纖維化機制的實驗研究和藥物篩選。
2.垂體後葉素誘導的心肌壞死模型
垂體後葉素能強烈收縮冠狀動脈,從而引起心肌缺血缺氧性壞死。
成年大鼠或兔,本節以大鼠為例,不分性別。
心電描跡的處理和以前壹樣。
大鼠股外側肌肉註射加壓素,每日1次,劑量為10~20 U/kg體重,連續2天。
1, 5, 10, 30 ...每次註射後30分鐘,用針電極心電圖儀記錄心電圖,觀察急性心肌缺血的變化。
垂體後葉素註射後心肌壞死和纖維化的時序與異丙腎上腺素所致大鼠心肌壞死和纖維化的時序相似,可在末次註射後第2天、1周、第3周取心臟進行病理觀察。
最後壹次註射後48小時,取心臟進行病理檢查。多數大鼠心肌出現多發性小局竈性心肌壞死,壞死竈內心肌細胞消失,出現大量巨噬細胞和成纖維細胞。壞死病變壹般較小,以左心室壁的內側、中間和室間隔為最多。少數動物可在心室壁形成典型的大面積帶狀梗死。梗死區心肌凝固性壞死伴有出血,心內膜下可殘留壹薄層壞死的心肌細胞。
該模型可用於缺血缺氧引起心肌損傷的機制及預防的實驗研究。從病理模型上看,垂體後葉素引起心肌壞死的範圍和數量在不同動物間差異很大,不如異丙腎上腺素引起的心肌壞死穩定。
3.冠狀動脈結紮誘導心肌梗死模型
以前常用狗和豬作為實驗對象,但價格昂貴,不方便飼養,所以近年來轉向小動物。由Selye簡化、Bajusz改進的大鼠心肌梗死制作方法趨於成熟,已在國內外廣泛應用。這裏以老鼠為例來介紹。
結紮動物左冠狀動脈前降支造成供血區心肌梗死。梗死發生快,缺血區壹般固定,可利用動力學、心電監護、組織學檢查、血清酶學等指標綜合評價梗死範圍和損傷程度。
壹般選用體重200~300g的大鼠,性別不限。
大鼠專用氣管插管和微型人工呼吸器
用乙醚麻醉大鼠,仰臥位固定,剪去胸部,用碘酒消毒。
有條件時采用氣管插管,連接微型人工呼吸器,將心電圖置於體表進行監護。這種手術可以不用氣管插管,但手術安全性差。
在胸骨左側平行於胸骨做壹個縱向切口,切開皮膚和胸大肌,露出肋骨。在距胸骨約0.5cm處切開第5、6肋軟骨,打開胸腔和心包,露出心臟。輕輕按壓胸部,將心臟擠出胸腔。Bajusz介紹的方法是只切開第六肋軟骨,或者不切開肋軟骨,只用鑷子把第五、第六肋軟骨的縫隙拉大,或者把心臟擠出來。
大鼠冠狀動脈自主動脈分支後肉眼難以識別,需要借助解剖標誌確定其位置。如需結紮左冠狀動脈,心臟擠出後用左手拇指和食指捏住大鼠心臟,心尖略指向頭部右側。用小彎針穿000000絲線,從肺動脈錐左緣進入,穿過進入點與左心耳根部之間假想線的中間,與絲線穿過的心肌壹起結紮。結紮部位在左冠狀動脈開口下方約65438±0mm處。如需結紮右冠狀動脈,用專用牽開器打開右心耳,結紮於肺動脈圓錐右緣,主動脈壁附近。結紮後把心臟放回胸腔。
用心電圖監測,判斷結紮成功後,用切胸腔時保留的縫合線封閉胸壁。縫合皮膚。取下氣管插管和心電圖電極。
結紮時心電圖出現急性缺血性改變,如II導R波尖端偏高,ST段擡高,Q波出現並加深等。結紮24小時後,光鏡下即可判斷心肌梗死的變化。結紮後4-7天,活躍的肌成纖維細胞和成纖維細胞在梗塞竈周圍增殖。2 ~ 3周,進入修復纖維化階段;第四周可以形成肉眼可見的疤痕。
在結紮後的短時間內且在光鏡下心肌梗塞損傷完全形成之前,心臟樣品的組織化學染色可用於顯示由心肌缺血引起的脫氫酶活性的喪失。例如,將心肌組織放入新配制的鹽酸硝基四氮唑藍溶液中,正常心肌呈藍色,梗死心肌不著色。並可用於計算梗塞面積。
結紮後第3 ~ 4d ~ 4d,光鏡下可見心肌梗死的典型改變:①在梗死中心,心肌細胞和心肌間質呈凝固性壞死,壞死的肌細胞嗜酸性,核破裂消失。部分可見間質出血或中性粒細胞浸潤。②梗塞竈周圍可見收縮帶壞死和心肌細胞的凝固性溶解。③梗死竈周圍,部分心肌細胞出現空泡變性,甚至陷入液化性肌溶解。④在梗死部位的心內膜下層和靜脈竇周圍常遺留壹薄層心肌細胞,這些心肌細胞未壞死或僅有空泡變性-液化性肌溶解。
結紮冠狀動脈的心肌梗死模型是有效的,可用於冠心病心肌梗死發生機制和預防的實驗研究。大鼠這種手術的死亡率與手術的熟練程度和人工呼吸裝置的使用有關。壹般術後存活率可達60%以上。有資料說,術後24小時,雄鼠死亡率約38%,雌鼠死亡率20%。