壹、妖精長生之路
二、樣本類型
流式細胞儀可以檢測多種樣本:外周血、骨髓、細胞穿刺液、洗脫液、固體組織、培養細胞和微生物。
三、工作原理
流式細胞儀主要由液流系統、光學系統和電子系統三部分組成。熒光染色後的待測細胞會在壹定的氣體壓力下被壓入流動室，待測細胞在鞘液的包裹下排成單行依次通過檢測區。被熒光染色的細胞在激光束的照射下會產生散射光和激發熒光。這兩個信號由光電倍增管(PMT)同時接收。接收後可以轉換成電信號，再通過A/D轉換器將連續的電信號轉換成計算機可以識別的數字信號。
四、流式細胞術的應用
動詞 （verb的縮寫）操作時的註意事項
1，在計算機上預處理
當心熒光猝滅
操作必須嚴格遵循孵化時間。如果抗體孵育時間過長，熒光會逐漸淬滅。如果我們不得不推遲實驗呢？可以把試管放在冰裏，這樣會稍微延長淬火時間。
註意染色順序
進行多重熒光染色時，由於染色順序不同，相同的細胞會有不同的熒光強度。解決方法是:預實驗。制作壹系列不同染色順序的樣品，對染色前後的樣品進行對比分析，判斷染色順序對細胞的影響。
選擇壹個好的染色方案
不合理的染色方案也可能導致熒光染色信號弱。解決方法:預實驗。在開始實驗之前，通過預實驗設計了壹個完美的染色方案。(考慮試劑類型、試劑質量、試劑用量、孵育時間、洗滌次數、染料濃度、染色時間、染色溫度等其他因素。)
做好陰性對照和同型對照試驗。
細胞陰性對照可以顯示細胞參照的熒光水平。
同型對照是檢查抗體的非特異性結合水平。選擇同型對照時要註意同種、同亞類、同染料、同濃度，否則檢測時同型對照的結果會很亂。
選擇合適的抗體。
總的原則是對最弱的抗原選擇染色指數最高的熒光素。根據流式細胞儀、激光器和過濾器的性能。對於多色實驗，需要選擇發射光譜重疊小的染料。
2.參數設置
數據的采集必須建立在儀器性能校準的基礎上。光電倍增管電壓的設置、儀器散射光和熒光信號的增益和顏色補償將直接影響結果。
電壓
應根據負控管調整電壓。
閾值
任何參數和多個參數的組合都可以作為閾值；大多數樣品可以設置FSC/SSC；；低於閾值的信號不被存儲；可以根據陰性對照管進行調整。
目的是扣除不必要的雜質信號、噪聲信號、無用細胞信號等。，使得所有收集到的信號都是有用的信號。
賠償
在流式細胞術中，經常使用兩種以上的熒光標記抗體進行染色，但目前使用的各種熒光染料的發射光譜存在壹定程度的重疊。熒光補償可以去除任何熒光信號，除了來自檢測器種類的匹配熒光。
補償模式:可以在任意兩個通道之間調節。
補償的調整:根據單個染色控制管。
不及物動詞數據分析
流式細胞儀對細胞各種參數的分析是通過光信號實現的。光信號包括散射光信號和熒光信號。散射光信號包括前向角散射(FSC，反應池的尺寸)和側向角散射(SSC，反應池的顆粒尺寸)。熒光信號可用於反映細胞的化學特征，如抗原表達。
流程圖有很多種，最常用的是流程直方圖和流程散點圖。
柱狀圖
流量直方圖只能顯示壹個通道的信息。
橫坐標表示熒光信號或散射光信號的相對強度，單位為對數，可以是線性坐標，也可以是對數坐標。縱坐標通常是細胞的數量。
散點圖
x坐標是單元格壹個參數的相對含量，Y坐標是單元格另壹個參數的含量，可以分隔單元格子集。
FSC和SSC是流動中的兩個非常基本的參數，FSC的值可以代表細胞的大小。細胞越大，其FSC就越大。SSC代表細胞的粒度，細胞內的細胞器和粒度越大，SSC越大。在分析外周血細胞時，我們可以利用FSC和SSC的特性將細胞分為淋巴細胞、單核細胞和粒細胞(左圖)。
在右邊，我們可以看到X軸是CD3，Y軸是CD4。四個象限分別代表:左上角的CD3-CD4+,左下角的CD3-CD4-,右上角的CD3+CD4+,右下角的CD3+CD4-。
等高線和密度圖
等高線圖:類似於地圖中的等高線，同壹條線上的單元格數量相等，裏面的曲線代表單元格越多。
密度圖:點密度越大，細胞越多，點密度越小，細胞越少。
三維的